扎里奴思方对大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障通透性的影响及作用机制研究

摘要

目的：
　　①通过检测神经功能评分、脑组织含水量、脑组织病理形态和超微结构变化，观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护及神经功能恢复作用。
　　②通过检测IgG（Immunoglobulin G）含量和AQP-4（Aquaporin-4）表达变化，动态观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响。
　　③通过观察扎里奴思方对ZO-1（Zonula occludens-1）、VCAM-1（Vascular cell adhesion molecule-1）和P-gp（P-glycoprotein）表达变化，探讨其调控血脑屏障通透性可能的作用机制。
　　方法：
　　①SD雄性大鼠，月龄3个月，250只，体重(300±50)g，随机分为假手术组A、模型组B、尼莫地平组C、扎里奴思方组D、联合用药组E（扎里奴思方+尼莫地平），其中后4组分别根据取材时间分为1、3、7、14d组，每组15只，假手术组10只大鼠。
　　②局灶性脑缺血再灌注大鼠模型(MCAOR)是采用线栓阻塞大脑中动脉，2h后拔出线栓进行再灌注；
　　③假手术和模型组用生理盐水灌胃，药物治疗组分别用相应的药物灌胃。大鼠灌胃用药量根据生药材含量按等效剂量换算关系计算，灌胃体积为1ml·100g-1，扎里奴思方为1.50g·mL-1；尼莫地平1.08mg·mL-1。大鼠术后3小时开始用药，每日用药1次。
　　④采用Garcia JH评分方法对大鼠进行神经功能评分；采用干湿重法测定脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织含水量变化；HE染色法观察脑组织病理形态，透射电镜下观察大脑神经元和微血管超微结构变化；采用免疫组织化学法检测大鼠脑缺血再灌注损伤后IgG、ZO-1、AQP-4、P-gp、VCAM-1的表达变化。
　　结果：
　　1.大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞的结构变化和神经功能恢复
　　①脑组织病理形态改变：假手术组大鼠脑组织结构完整，神经元细胞丰富，细胞大小均匀一致；模型组大鼠脑组织损伤侧可见神经元细胞萎缩，空泡样变，排列疏松，脑组织水肿；各药物组神经细胞结构有不同程度改善，尤以扎里奴思方和联合用药14d组恢复的尤为显著。
　　②脑组织超微结构改变：假手术组神经元细胞核膜完整、核仁清晰、染色质均匀、细胞器丰富；模型组神经元细胞损伤明显；与模型组相比，各药物组神经元细胞结构均有不同程度改善，以扎里奴思方和联合用药组作用尤为明显。
　　③大鼠脑组织含水量变化：与假手术组比较，模型组大鼠脑组织损伤侧含水量明显增高,3d达到峰值，7、14d有所下降（P＜0.01，P＜0.05)；与模型组比较，药物组各时间点大鼠脑组织损伤侧含水量均降低（P＜0.01，P＜0.05)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方3、14d组和联合用药各组大鼠脑含水量降低（P＜0.05）。
　　④大鼠神经功能评分变化：与假手术组比较，模型组大鼠的神经功能评分较假手术组均降低明显（P＜0.01)；与模型组比较，药物组大鼠各时间点神经功能评分均显著增高（P＜0.01)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方14d组和联合用药7、14d组神经功能评分增高（P＜0.05，P＜0.01)。与3d组比较，联合用药7、14d组和扎里奴思方14d组神经功能评分均增高（P＜0.01，P＜0.05)。
　　2.大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性变化的相关指标
　　①大鼠脑组织中IgG含量变化：与假手术组比较，模型组各时间点大鼠脑组织中IgG含量1d即开始升高，3d达到峰值，7、14d有所下降，但仍高于假手术组。(P＜0.01)；与模型组比较，药物组各时间点大鼠脑组织中IgG含量降低(P＜0.01，P＜0.05)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方3、14d组和联合用药组各时间点IgG含量均明显降低(P＜0.01，P＜0.05)；与扎里奴思方组比较，联合用药1、3d组IgG含量降低(P＜0.05)。
　　②大鼠脑组织中AQP-4表达变化：与假手术组比较，模型组各时间点大鼠脑组织中AQP-4的表达均显著增高（P＜0.01)，1d即开始升高，3d达到峰值，7、14d有所下降；与模型组比较，药物组各时间点大鼠脑组织中AQP-4的表达均显著降低（P＜0.01，P＜0.05)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方14d和联合用药7、14d组AQP-4的表达降低（P＜0.01，P＜0.05)。
　　3.扎方调控大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障通透性的机制
　　①大鼠脑组织VCAM-1表达变化：与假手术组比较，模型组各时间点VCAM-1表达均显著增加(P＜0.01)；与模型组比较，各药物组1、3、7d组VCAM-1表达显著降低(P＜0.01)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方组和联合用药组VCAM-1表达有降低趋势，但无显著的统计学差异。
　　②大鼠脑组织ZO-1表达变化：与假手术组比较，模型组各时间点ZO-1表达均显著降低(P＜0.01)；与模型组比较，药物组各时间点ZO-1表达均显著增加(P＜0.01)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方组和联合用药组ZO-1表达均显著增加(P＜0.01)；与扎里奴思方组比较，联合用药1、3d组ZO-1表达显著增加(P＜0.01)。
　　③大鼠脑组织P-gp表达变化：与假手术组比较，模型组各时间点P-gp表达均显著增加(P＜0.01)；与模型组比较，尼莫地平7、14d组、扎里奴思方3、7、14d和联合用药3、7、14d组P-gp表达明显降低(P＜0.01，P＜0.05)；与尼莫地平组比较，扎里奴思方3、7、14d组和联合用药3、7、14d组P-gp表达明显降低(P＜0.05)；与扎里奴思方组比较，联合用药1d组P-gp表达明显降低(P＜0.05)。
　　结论：
　　1.扎里奴思方对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞有明显的保护作用，减轻脑水肿，促进神经功能恢复，且随着用药时间的延长，其脑保护作用呈逐渐增强趋势。
　　2.大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性呈现先增强后降低变化，3d达到峰值，扎里奴思方降低血脑屏障通透性的作用显著，且随着时间的延长，其作用逐步增强。联合用药在脑缺血再灌注损失早期降低血脑屏障通透性的作用更为明显。
　　3.扎里奴思方降低血脑屏障通透性的机制可能与降低VCAM-1、P-gp表达和上调ZO-1表达有关。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

实验一 扎里奴思方对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用研究

材料与方法

结果

讨论

结论

实验二 扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性影响及作用机制研究

材料与方法

结果

讨论

结论

总讨论

结论

参考文献

文献综述:中医药调控脑缺血损伤血脑屏障通透性的作用机制的研究进展

致谢

攻读学位期间发表论文情况

个人简历

附图一 病理照片

附图二 电镜照片

附图三 免疫组化照片