围产期奶牛脂肪肝发病风险评估及敏感性血清诊断指标筛选研究

摘要

本试验通过两个部分，首先探究围产期脂肪肝相关血液指标变化，并确定疑似脂肪肝发病率，然后通过检测脂肪肝敏感血清指标来确定一种可能的脂肪肝生物标记物。
　　 第一部分:分别在预产期前28天、21天、14天、7天和产后2天、9天、16天和23天早饲前采集血清样测定NEFA、Glu和AST。发现NEFA在分娩后第2天到达最高水平，并在分娩后一直处于较高水平;Glu在分娩前处于较高水平，从分娩前第7天呈下降趋势，分娩后处于较低水平;AST分娩前处于较低水平，分娩前7天呈上升趋势，至分娩后第9天到达最大值。疑似脂肪肝发病率在分娩后第16天到达最大值(66.48％)，而3胎及以上奶牛疑似脂肪肝发病率在分娩后各个时期都高于3胎以下奶牛组。
　　 第二部分:采集产后三个月以内的奶牛肝脏和血清。根据肝脏甘油三酯占肝脏湿重的比例将奶牛分为正常组和脂肪肝组。通过ELISA方法测定血清中磷脂酶A2、成纤维细胞生长因子-21、血红蛋白α、血红蛋白β、1，25-二羟基维生素D3含量，分析差异。结果发现成纤维细胞生长因子-21和血红蛋白β在两组之间坶出现明显差异P值分别为0.0269和0.0312。我们推断这两种蛋白或许可以作为奶牛脂肪肝的血清生物标记物。将成纤维细胞生长因子-21和血红蛋白β平均值上下调整，根据误诊率和漏诊率确定脂肪肝诊断标准分别为1091.91ng/L和3.03ng/L。肝脏甘油三酯与血清中成纤维细胞生长-21有显著的正相关，但是相关系数仅为0.4939。分别拟台了成纤维细胞生长因子-21、血红蛋白β、脂蛋白相关磷脂酶A2三种指标与肝脏甘油三酯的回归方程，成纤维细胞生长因子-21、脂蛋白相关磷脂酶A2两种指标与肝脏甘油三酯的回归方程，单纯成纤维细胞生长因子-21与肝脏甘油三酯的回归方程三种回归方程，但是R2均较低，分别为0.3328,0.3229和0.2823。

目录

声明

符号说明

摘要

1．前言

1．1 脂肪肝病因学

1．1．1 营养和管理因素

1．1．2 奶牛个体因素

1．1．3 遗传因素

1．2 脂肪肝分级

1．3 脂肪肝病理学

1．3．1 脂肪肝一般病理学

1．3．2 脂肪肝的组织和代谢病理学

1．3．3 脂肪肝的临床病理学

1．3．4 脂肪肝的免疫病理学

1．4 脂肪肝危害

1．4．1 重度脂肪肝

1．4．2 轻度和中度脂肪肝

1．4．3 脂肪肝发生危害的原因

1．5 脂肪肝诊断

1．5．1 肝脏活体采样

1．5．2 血清生化指标方法

1．5．3 多普勒超声波诊断方法

1．5．4 血清蛋白质组学方法

1．6 脂肪肝的防治

1．6．1 轻度和中度脂肪肝的防治

1．6．2 重度脂肪肝的防治

1．7 研究的目的及意义

1．8 研究内容

1．8．1 围产期奶牛脂肪肝发病风险评估

1．8．2 敏感性血清诊断指标筛选研究

2．材料和方法

2．1 围产期奶牛脂肪肝发病风险评估(试验一)

2．1．1 样品采集

2．1．2 测定试剂

2．1．3 测定仪器

2．1．4 试验方法

2．2 奶牛脂肪肝敏感性血清学生物标记筛选研究(试验二)

2．2．1 样本来源

2．2．2 仪器设备

2．2．3 测定试剂

2．2．4 材料处理

2．2．5 技术路线

2．3 数据处理

2．3．1 数据处理(试验一)

2．3．2 数据处理(试验二)

3 结果与分析

3．1 围产期奶牛脂肪肝发病风险评估

3．1．1 血清中NEFA、Glu、AST的变化

3．1．2 产后奶牛疑似脂肪肝发病率变化

3．1．3 疑似脂肪肝发病率与胎次的关系

3．2 奶牛脂肪肝敏感性血清学生物标记筛选研究

3．2．1 两组疑似奶牛脂肪肝相关生物标记物变化

3．2．2 血清指标与肝脏甘油三酯相关性分析

3．2．3 甘油三酯与血清指标回归分析

3．2．4 成纤维细胞生长因子-21和血红蛋白β诊断标准确定

4．讨论

4．1 围产期奶牛脂肪肝发病风险评估

4．1．1 围产期奶牛脂肪肝疑似发病率的变化

4．1．2 奶牛围产期脂肪肝相关指标的动态变化规律

4．1．3 围产期疑似脂肪肝发病率与胎次的关系

4．2 奶牛脂肪肝敏感性血清学生物标记筛选研究

4．2．1 两组奶牛脂肪肝相关生物标记物变化

4．2．2 肝脏甘油三酯与血清指标相关关系和回归关系

4．2．3 血清蛋白指标作为脂肪肝诊断标准确定

5．总体结论与研究展望

5．1 总体结论

5．2 本试验的创新点

5．3 研究展望

参考文献

附录

致谢