猪转移因子的研制及其对猪免疫功能的增强作用

摘要

转移因子（transfer factor, TF）由白细胞中具有免疫活性的T淋巴细胞产生，分子量小，化学本质为小肽与寡聚核苷酸复合物。本试验通过采集健康的猪脾脏，透析法制备非特异性TF，经检测TF，结果蛋白反应阴性、多肽含量等于0.615mg/ml、OD260/OD280为2.35，核糖含量测定45.2(ug/ml)。结果与资料报道TF质量控制标准相一致。通过生物学试验检测TF，结果显示:TF无毒、无热源性、无过敏性，巨噬细胞吞噬中性红现象明显，E-玫瑰花环结花率升高，说明TF具有免疫功能活性。本研究采用ELISA、流式细胞技术、全自动血细胞分析仪检测了试验猪TF配合疫苗注射，不同时间检测猪口蹄疫、圆环病毒抗体的变化，淋巴细胞数和比率的变化，T细胞亚群的变化，在免疫应答调控中起重要作用的细胞因子(IL-2和IFN-γ)分泌量的变化。在此基础上，提出降低猪圆环病毒疫苗使用剂量可行性，紧急预防猪口蹄疫配合TF的必要性。
　　 本研究共分为以下四个部分:
　　 第一部分转移因子制作
　　 转移因子(TF)制作工艺是:用猪脾置入捣碎机捣碎匀浆后冷冻、融化、冻融6-8后透析，透析液经理化性质和生物学特性符合要求即为合格制品。
　　 第二部分转移因子的免疫增强效果
　　 符合要求的转移因子作为一种安全、经济、使用方便、高效的疫苗佐剂显示巨大的免疫增强效果，具体表现为:用原液的TF，防疫口蹄疫疫苗同时肌注转移因子3ml，第二天再注射3ml转移因子，能提高猪口蹄疫抗体含量，即从注射后7d的70 ng/L左右至35日龄上升到300 ng/L以上;可以提高血液淋巴细胞比率、淋巴细胞数;可提高淋巴细胞分泌IFN-γ，可促进淋巴细胞分泌IL-2;分泌IFN-γ时间较短，本试验结果为注射后7日最高;淋巴细胞分泌IL-2时间较长，28日达到最高。
　　 第三部分转移因子可作为疫苗佐剂，减少疫苗使用量
　　 用转移因子原液，12日龄仔猪防疫猪圆环病毒疫苗1.2ml同时肌注转移因子3ml，第二天再注射3ml转移因子，7-35日龄时间段，能达到防疫2ml圆环病毒疫苗同样效果，即转移因子作为疫苗佐剂使用显示的巨大的免疫增强效果;同样用转移因子原液制品，12日龄仔猪防疫猪圆环病毒疫苗0.9ml同肌注转移因子3ml，第二天再注射3ml转移因子，与单防疫2ml圆环病毒疫苗相比，前者一些指标效果不及后者，且差异显著，有统计学意义(P＜0.05)。
　　 第四部分转移因子可提高猪外周血CD4+细胞数量及CD4+/CD8+比值
　　 防疫猪口蹄疫疫苗2ml配合肌肉注转移因子3ml，第二天再注射3ml转移因子;对照组仅肌肉注猪口蹄疫疫苗2ml，7、14、21日龄检测结果显示:T淋巴细胞亚群CD4+T细胞百分数14日龄达到最高，CD4+/CD8+比值也是最高，随后稍下降;相同日龄，试验组比对照组CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值都高，试验组与对照组差异显著，有统计学意义(P＜0.05)，即转移因子可提高猪外周血CD4+细胞数量及CD4+/CD8+比值。

目录

声明

符号说明

摘要

一、综述部分

1．引言

1．1 细胞因子

1．2 转移因子

1．3．猪口蹄疫免疫防治研究进展

1．4 猪圆环病毒2型免疫学及疫苗研究进展

1．5 本研究的目的意义

二、试验研究部分

2．材料和方法

2．1 材料

2．2 方法

2．3 TF对猪口蹄疫疫苗的免疫增强作用

2．4 TF对猪圆环病毒疫苗的免疫增强作用

2．5．流式细胞术检测猪抗凝血中CD4+、CD8+水平

3．结果与分析

3．1 TF的性质

3．2 TF对猪口蹄疫疫苗的免疫增强作用

3．3．TF对猪圆环病毒疫苗的免疫增强作用

3．4．流式细胞术检测猪淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平

4．讨论

4．1 转移因子(TF)制作工艺

4．2 转移因子(TF)对猪口蹄疫疫苗的免疫增强作用

4．3 TF作为疫苗佐剂具有显著的增强疫苗效果

4．4 TF可提高猪外周血CD4+细胞数量及CD4+／CD8+比值

5．结论

参考文献

致谢

个人简介

攻读硕士学位期间发表的论文