地方品种青脚麻鸡禽白血病的感染状态调查及其初步净化研究

摘要

禽白血病(avian leukosis，AL)在鸡群中引起的病理变化和临床表现多种多样，从免疫抑制、生长迟缓、产蛋下降，蛋品质下降等，直到明显的特征性的肿瘤发生以至于死亡，致死率较低。禽白血病病毒主要经种蛋垂直传播，水平传播的能力较弱，从祖代、父母代到商品代逐级放大极难净化彻底。本研究目的在于以ALV感染水平的调查为基础，引进血液样品直接PCR检测的方法作为禽白血病经典净化方法的有力补充。
　　1.感染状态的调查
　　为了探究禽白血病在山东某地青脚麻鸡核心群中感染状态，先后采取多种材料检测禽白血病病毒的存在，包括采用酶联免疫吸附试验检测泄殖腔棉拭子、卵白、细胞上清、血清中的P27抗原。调查过程中共涉及9个品系，各品系的泄殖腔棉拭子阳性率:A系为24.97％(227/909)，B系为5.71％(14/245)C系为16.23％(69/425)，D系20.00％(24/120)，E系10.33％(137/1326)，F系为46.67％(14/30)，H系为33.33％(8/24)，S系为0(0/12)，X系为75％(9/12)。病毒的细胞培养，阳性率为14.8％(71/479)，A系阳性率达到31.4％(65/206)，D系阳性率为2.46％(4/162)，s系阳性率为16.6％(2/12)。结果表明，ALV在整个青脚麻原种鸡群中的感染率已经较高，且不同品系间存在较大差异。
　　2.检测方法优化研究
　　为了提高病毒检出率，对同一批鸡选用多种方法鸡进行重复检测，所有检测鸡只的不同材料编号均一一对应。鸡卵白抗原p27和对应鸡只的泄殖腔棉拭子抗原p27阳性率分别为3.3％(1/30)、20％(6/30)，棉拭子抗原p27阳性率明显比卵白P27阳性率要高，且两者阳性个体不吻合，说明该鸡群泄殖腔排毒率要显著高于前者，两者同时检测可以提高病毒检出率。血液样品与泄殖腔棉拭子等对比检测，结果显示，血清、泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原阳性率分别为20.34％(36/177)、26.55％(47/177);在CEF上进行病毒分离率为1.70％(3/177);血液样品的直接PCR方法检出J亚型ALV(ALV-J)的阳性率为0.56％(1/177)，序列结果分析表明为与经典ALV-J分离株的同源性为87.0％～98.4％，但该血液样品的病毒分离结果为阴性。本研究表明，血液样品直接PCR方法检测ALV-J的应用有助于减少禽白血病净化病毒分离结果可能出现的缺漏。在此基础上，优化并进一步拓展对其他亚型ALV的直接PCR方法检测，可作为禽白血病经典净化方法的有力补充。
　　3.ALV核心鸡群建立过程中初步净化研究
　　选择两个ALV感染率差距较大的核心品系进行AL的净化和选育工作。
　　具有优良性状但感染率极高的核心品系是由1只具有优良性状的种公鸡（ALV阳性），并搭配6只阴性母鸡、8只阳性母鸡建立起来的。对其第一代全部采血后接DF1细胞分离病毒，病毒分离率为46.6％(54/116)，泄殖腔棉拭子抗原检测阳性率为53.45％(62/116)，淘汰阳性鸡只隔离饲养。追踪第二代，第一次检测部分公鸡泄殖腔棉拭子ALV抗原阳性率为6.25％(2/32)，检测卵白阳性率为1.2％(3/145);第二次检测，全血PCR方法阳性率5.12％(4/78);第三次无菌抗凝血接细胞，病毒分离率为0％(0/64)，阳性率降低非常明显，净化取得一定成果。
　　感染率较低的核心群的初步净化结果如下，第一世代的泄殖腔棉拭子阳性率为8.3％(20/240)，卵白检测阳性率为8％(8/100)。第二世代根据目的性状，选取部分鸡只进行检测。细胞培养阳性率为0(0/22)，卵白抗原检测为8％(1/120)，阳性率降低比较明显。第三世代采集样品进行抽检，细胞培养阳性率为0.96％(1/104)，泄殖腔棉拭子阳性率为7.7％(8/104)，阳性比率下降不明显，但维持在比较低的水平，应加强检测力度进一步降低阳性率。本研究表明，不同程度感染ALV的青脚麻鸡鸡群均可以进行AL的净化和选育工作。