济宁青山羊生后发育过程中GHR和IGF-IR在卵巢分布及其mRNA表达

摘要

动物的生殖生理调控机制复杂，是体内多种激素与调控因子协同作用的结果。卵巢是动物体内重要的生殖器官。之前的研究认为，在卵泡形成和生长发育过程中，以内分泌为主，即下丘脑-垂体-性腺轴为主，在此基础上建立了比较完整的理论体系。根据近年来的研究，我们得出卵泡在形成与生长发育过程中，卵巢的自分泌和旁分泌因子也参与调节过程。其中，生长激素(Growth hormone，GH)与胰岛素样生长因子(Insulin likegrowth factor，IGF)就是两类重要的激素。GH和IGF-Ⅰ要发挥作用，需要由其靶细胞的生长激素受体(Growth hormone receptor，GHR)、胰岛素样生长因子Ⅰ受体(Insulin likegrowth factorⅠ receptor，IGF-IR)介导。所以，受体基因的表达对动物的生长发育有着很大的影响。
　　济宁青山羊是我国典型的山羊品种，其具有适应性强，性成熟早，繁殖率高，遗传性稳定，耐粗饲，性温驯易管理等优良品质。随着人们对生活质量要求的提升，对羊肉及羊皮的需求量也不断增多，因此，研究怎样使山羊的繁殖力获得提升，增加山羊的经济效益，具有重要的意义。
　　本试验应用免疫组织化学技术、实时荧光定量PCR技术和Western Blot法对济宁青山羊生后发育过程中卵巢中GHR、IGF-IR的定位、分布情况和GHR mRNA、IGF-IRmRNA的表达规律进行了研究，并对两种受体蛋白大小进行了鉴定，试验结果显示:
　　1.GHR与IGF-IR免疫阳性物质主要分布于卵巢的各级卵泡、血管平滑肌细胞以及间质细胞中，随着日龄的增长，阳性物的分布会发生变化，并呈现一定的规律性。GHR在0d-60d阶段主要是集中在卵巢皮质的某个区域，着色的是原始卵泡、初级卵泡内卵母细胞的胞质;90d-180d阶段在皮质浅层的原始卵泡周围的细胞上分布，而皮质稍深些的原始卵泡周围细胞却呈阴性。初级生长卵泡各结构均为阴性。次级生长卵泡上可见有GHR阳性物质存在，但主要是分布在卵泡膜细胞和卵泡颗粒细胞上。IGF-IR阳性细胞在0-60d时，主要分布在原始卵泡、以及卵泡膜细胞与血管内膜细胞中;在90d-180d时，主要出现在初级卵泡的卵母细胞与颗粒细胞，次级卵泡的颗粒层与卵泡膜层以及成熟卵泡的颗粒层中。
　　2.GHR在不同日龄阶段的mRNA的表达量差异不显著;IGF-IR mRNA的表达量从0d-180d呈现先上升后下降的趋势，在60d时表达量显著高于其他日龄阶段(P＞0.05)，到180d时达到最小值。
　　因此，对于GHR与IGF-IR在卵巢中的生物学功能应综合其位置与表达量两种因素分析，60d（初情期）可能是两种受体在卵巢发挥最大作用的阶段，但关键还是要看在哪个发育阶段、哪种卵泡上表达。