鸡MHC基因多态性及其与抗马立克氏病的相关性研究

摘要

马立克氏病(Marek's Disease，MD)是由具有高度传染性、致瘤性的疱疹病毒科马立克氏病毒引起的一种细胞结合性鸡淋巴组织增生性免疫抑制性传染病，对养禽业危害极大。
　　鸡的主要组织相容性复合体（Major Histocompatibility Complex，MHC）基因是由一组紧密连锁且高度多态的基因座组成的，参与体内外抗原呈递的遗传区域，在动物的免疫应答、免疫调控中扮演着重要角色。鸡的干扰素-γ（IFN-γ）基因是由感染病毒的细胞释放的一种细胞因子，干扰其他细胞病毒复制，对于机体的肿瘤发生、移植排斥反应、免疫调节及免疫系统的平衡至关重要，IFN-γ基因具有诱导某些肿瘤细胞表达MHCⅠ类和MHCⅡ类抗原的作用，可促进此抗原诱导的自身T细胞数量的增加和CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。家禽IFN-γ基因的表达量与其对马立克氏病的抗性密切相关。MHC基因的不同基因型对MD的抗性不同，主要表现在其对IFN-γ等细胞因子的表达调控程度的不同等方面。
　　本文对寿光鸡(SG)、济宁百日鸡(JB)、汶上芦花鸡(WL)、SPF白来航鸡(SPF)的MHC基因进行了遗传多样性分析，根据位于MHCⅣ区域的LEI-0258的微卫星位点，通过荧光PCR检测技术，共筛选到32种等位基因，四种鸡群的等位基因数依次分别是9个、10个、8个和5个;其有效等位基因数依次分别是4.2050、5.2478、2.3346和1.8987;其期望杂合度依次分别是0.7756、0.7232、0.5814和0.4814。
　　为进一步探索不同品种鸡群MHC的特异基因型对MD的抗性差异，分别对寿光鸡、济宁百日鸡、汶上芦花鸡和SPF白来航鸡进行了人工感染试验，根据肿瘤发生率与死亡率对寿光鸡、济宁百日鸡、汶上芦花鸡和SPF白来航鸡进行了统计分析，结果发现:SG的主要基因型是SG-B，MD抗性基因型是SG-C;以SG-A型鸡个体的死亡率最高，其抗病性相对最低;JB的主要基因型是B74，MD抗性基因型是JB-A，对MD抗性最差的是NYCAU-46型;WL的主要基因型是B74，MD抗性基因型是NYCAU-50，对MD抗性最差的是NYCAU-33型;SPF鸡群的主要基因型是NYCAU-17，MD抗性基因型是B74，易感的是NYCAU-46型和NYCAU-51型。通过荧光定量PCR技术对寿光鸡的MD抗性基因型、MD易感基因型与主要基因型的IFN-γ基因的表达量差异及其抗性相关性进行了检测，分析结果表明，MD抗性基因型的IFN-γ基因的mRNA含量要高于MD易感基因型，但MD抗性基因型、MD易感基因型与主要基因型三者之间差异并未达到显著水平(p＞0.05);同时，对不同攻毒时间MHC主要基因型个体的IFN-γ基因的mRNA表达量进行了分析，结果发现:7d攻毒组在脾脏中的表达水平显著高于1d攻毒组(p＜0.05)，说明MD不同感染时间对鸡个体的抗性表达有显著影响。
　　综合分析以上研究结果，说明寿光鸡、济宁百日鸡、汶上芦花鸡和SPF白来航鸡的遗传多样性较为丰富;发现了四个鸡群的MD的抗性基因型与MD易感基因型;检测了寿光鸡抗性、易感和主要基因型个体的IFN-γ基因的mRNA表达量差异;发现不同感染时间对鸡个体的抗性表达有显著影响。研究结果为最终阐明鸡抗MD的遗传机制提供了重要分子遗传学数据。