洋葱皮中类黄酮化合物的提取分离、纯化以及结构鉴定研究

摘要

洋葱(Allium cepa L.)属百合科葱属，是一种二年生草本植物。洋葱在加工过程中会产生的大量洋葱皮，其中含有丰富的生物类黄酮化合物，如何研究开发和充分利用洋葱皮中的类黄酮，对于保护环境、节省能源、提高农产品附加值和增加农民收入具有十分重要的现实意义。
　　本实验以紫洋葱皮为实验材料，系统研究了洋葱皮中类黄酮的提取、分离纯化及其结构鉴定，主要研究结果如下:
　　1.采用密闭式微波辅助法提取洋葱皮中类黄酮，通过响应曲面法优化试验设计，确定提取工艺最佳试验参数:微波辐射功率256W，微波辐射时间150 S，乙醇体积分数为60％，料液比1∶35g mL-1。在此工艺下总黄酮理论预测提取量为46.60 mg g-1。工艺条件验证:微波辐射功率250W，微波辐射时间145S，乙醇体积分数为60％，液料比1∶35 g mL-1。相比洋葱皮总黄酮的理论预测值，实际提取量为46.52 mg g-1，二者吻合度良好。
　　2.通过比较三种大孔吸附树脂对类黄酮粗提液的吸附和解吸静态试验结果，筛选出D101大孔吸附树脂为最佳树脂。D101大孔吸附树脂的动态吸附与解吸试验，确定了洋葱皮类黄酮最佳纯化工艺为:常温下，径高比1∶18，上样液浓度为2.0 mg mL-1，上样流速1.5 mL min-1，70％乙醇溶液为洗脱液，洗脱流速为1.0 mLmin-1。在经D101大孔树脂初步纯化之前样品中总黄酮的纯度9.87％，样品完成初步纯化后纯度大幅度提升，约为63.16％，说明D101大孔树脂对洋葱皮类黄酮具有十分良好的富集纯化效果。
　　3.利用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析法对D101大孔树脂初步纯化制得的洋葱皮类黄酮样品进行精制。采用30％、50％、70％、90％以及无水甲醇进行梯度洗脱，洗脱流速为0.5 mL min-1，结果从90％甲醇洗脱部分和无水甲醇主要洗脱部分中分离得到较单一的组分OF1和组分OF2，采用RRLC/Q-TOFMS联用技术对两种组分进行高效分析鉴定。经鉴定确认OF1为槲皮素，组分OF2初步推断为槲皮素-3-O-葡萄糖苷，组分OF1利用HPLC测定纯度为92.11％。