烟草抗病促生复合微生物菌剂的研制及效果评价

摘要

烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var. nicotianae)和青枯病(Ralstonia solanacearum E.F Smith)是烟叶生产上危害最严重的病害，特别在多年连作的烟田，这两种病害的发生尤其严重。由于两种病害的病原菌主要存在于病田土壤，一旦发生很难治理。目前生产上对土传病害主要采用土壤消毒或药剂灌根等方式防治，大量土壤用药不仅对土壤及环境造成污染，而且持效短、病害容易反复。利用土壤有益微生物控制土传病害则可以避免上述问题。
　　本研究利用实验室前期从各地烟田土壤中分离获得的对青枯病菌和黑胫病菌有抗菌活性的PGPR细菌和木霉菌为材料，首先分析了各菌株对烟草黑胫病菌和青枯病菌的拮抗活性，从中选取抗菌活性较高的菌株6株，测定了各菌株对烟草幼苗的促生作用；将筛选出的菌株进行了培养条件优化，分析了不同添加物对拮抗细菌活性的影响；初步分析了菌剂组合的促生效果。主要研究结果如下：
　　1.生防细菌对烟草青枯病菌和黑胫病菌的抑菌作用
　　将实验室前期获得的PGPR(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria)细菌分别与烟草青枯病菌和黑胫病菌对峙培养，共获得5株拮抗效果较好的细菌菌株。这5个菌株都属于类芽孢杆菌属（Peanibacillus sp.），其中菌株H1-2、B1、H7-3-1为多粘类芽孢杆菌（Peanibacillus polymyxa）。
　　2.生防木霉菌株对烟草黑胫病的重寄生作用
　　将本实验室前期保存的深绿木霉菌株M5(Trichoderma atroviride)与烟草黑胫病原菌对峙培养，发现，13d后黑胫病菌菌丝体完全被木霉菌株覆盖。
　　3.各菌株室内促生防效分析
　　采用盆栽实验，分析了各菌株对烟草幼苗生长的影响，其中H1-2对烟苗的促生效果最好，其地上部和地下部鲜重分别比对照增加了81.18％、218.94%，其它各菌株对烟苗的生长也有明显的促进作用。
　　4.各菌株相互作用分析
　　对5株PGPR细菌与木霉菌株M5的相互作用分析，发现各拮抗细菌菌株与M5间无拮抗作用。将各拮抗细菌菌株间两两组合，分析各拮抗细菌菌株间有无拮抗作用。结果显示，PGPR细菌菌株B1、H1-2、H7-3-1、L2-3-1、NX1-4-4间均无抑制作用，拮抗细菌菌株与木霉菌株M5间也没有抑制作用。
　　4.复合菌株室内促生、防病防效分析
　　采用盆栽试验，分析了各菌株及复合菌株对烟草幼苗的生长，结果显示，复合菌株对烟草幼苗的促生效果最好，其地上部和地下部鲜重分别为23.34g、7.46g，分别比对照增加了41.54%、63.96%。对烟草黑胫病的防效为49.05%。
　　5.拮抗细菌菌株发酵条件的优化
　　以菌株B1为材料对复合菌株中细菌发酵培养基碳源、氮源及无机盐进行优化，筛选得到最适宜细菌菌株生长的培养基组分及配比为：1%碳酸钙、0.3%玉米粉、0.3%大豆粉。
　　进一步对其培养条件进行优化，发现最适于细菌菌株生长的条件为3%接种量、pH值7.0～7.5、装瓶量60ml(250ml锥形瓶)、温度为30℃、培养时间为48h。
　　6.不同添加剂对拮抗细菌活性的影响
　　将腐植酸、麦芽糊精、海藻酸钠等15种不同添加物按一定量分别加入到发酵液中，发现腐植酸、麦芽糊精、CMC-Na、海藻酸钠4种物质可以提高发酵液菌体存活率。通过正交设计试验以及贮存稳定性试验对液剂保护剂进行了研究，初步确定最佳添加保护剂配方为0.8%腐植酸+0.4%麦芽糊精+2%CMC-Na+1.5%海藻酸钠。

目录

声明

1 引 言

1.1 烟草黑胫病的研究进展

1.2 烟草青枯病的研究进展

1.3 植物病害生物防治研究进展

1.4研究目的与意义

1.5 技术路线

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 拮抗细菌发酵条件的优化

3 结果与分析

3.1 PGPR对病原菌的抑菌效果

3.2备选拮抗菌株相互作用分析

3.3 PGPR细菌发酵培养基的的优化

3.4 培养条件的优化

3.5 复合微生物制剂的制备

4讨论

4.1 拮抗细菌、真菌的促生及防病效果

4.2 发酵条件的优化

4.3 添加剂对菌体活性及保存期的效果测定

5 总结

参考文献

致谢