奇异变形杆菌与A亚群禽白血病病毒在SPF鸡中共感染的研究

摘要

本文对鸡胚卵黄中分离到的奇异变形杆菌进行分离鉴定，同时对奇异变形杆菌和ALV-A在SPF鸡中共感染进行研究。主要内容包括：⑴从死亡鸡胚的卵黄中分离到的疑似奇异变形杆菌的菌株，通过细菌培养、革兰氏染色镜检以及生化特性测定以及16S rRNA基因比对对分离菌进行鉴定。结果显示，分离菌的培养特性、革兰氏染色镜检以及生化特性符合奇异变形杆菌的特性，初步鉴定为奇异变形杆菌；应用PCR方法扩增出1465 bp的16S rRNA基因片段。经BLAST对比分析表明，与其同源性最高的均为奇异变形杆菌各株系的16S rRNA序列，同源性高达99％以上。检测结果表明，该分离菌为鸡奇异变形杆菌。⑵将分离并鉴定的鸡奇异变形杆菌，经传代培养、灭活、调整抗原浓度、无菌检测以及染色等方法，制备该菌的凝集抗原，并利用该抗原与弗氏佐剂（Freund's Adjuvant）混合免疫兔子制备该菌的标准阳性血清。结果显示，用甲醛灭活细菌制备的抗原比加热灭活的灵敏度要高，且抗原最佳灭活条件为0.5%的甲醛溶液（24 h）；凝集抗原的最适浓度为8.05×109 CFU/mL；最佳的染色液为草酸铵结晶紫染色液。制备的该菌的阳性血清经试管凝集试验测得效价可达1:512。⑶建立SPF雏鸡感染奇异变形杆菌和ALV-A的免疫抑制模型。将120只14日龄SPF鸡随机分4组，各组隔离饲养，分别为ALV-A组、PM组、PM+ALV-A组，空白对照组。每组鸡于第1、2、3、4、5、6周随机取3只，检测相关指标。结果显示，感染后第2-3周，各感染组均有部分鸡出现临床症状，共感染组死亡率（26.7%）要高于ALV-A组（20%）、PM组（16.7%）。各感染组胸腺、脾脏、法氏囊等免疫器官指数不同程度的低于对照组，并且共感染组加重对免疫器官的损伤程度。感染鸡在6周龄，肉眼观察内脏器官无明显的肿大或肿瘤结节，病理组织学观察到在肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊等器官内呈现淋巴细胞样瘤细胞和出血现象。外周血T淋巴细胞数检测、鸡白细胞介素（IL-2）和干扰素（IFN-γ）检测结果显示，单感染和共感染组的CD4+、CD8+T细胞数、白细胞介素（IL-2）和干扰素（IFN-γ）的分泌量均低于对照组，并且共感染时免疫抑制程度最明显。鸡体内P27抗原和ALV-A抗体水平波动很大，呈现一定的负相关。⑷该菌是奇异变形杆菌，研制的凝集抗原可用于鸡奇异变形杆菌感染或免疫后抗体的检测。奇异变形杆菌与ALV-A具有协同致病作用，共感染对SPF鸡的危害要比单感染严重。