二甲双胍对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞胰岛素受体底物-1及其磷酸化表达的影响

摘要

目的：
　　1.体外分离培养多囊卵巢综合征（PCOS）和非PCOS患者黄素化颗粒细胞并用卵泡刺激素受体（FSHR)免疫荧光鉴定；
　　2.探讨二甲双胍（Met）对PCOS黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物-1（IRS-1）及p-ser307-IRS-1的信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表达水平的影响。
　　方法：
　　分离纯化体外培养的PCOS和非PCOS组黄素化颗粒细胞用FSHR免疫细胞化学染色鉴定；添加Met处理培养为实验组，添加类胰岛素生长因子-1（IGF-1）为阳性对照组，15％FBS-M199培养基中加入与Met等量PBS培养为阴性对照组；通过RT-PCR和real-time PCR检测分析IRS-1mRNA的表达，细胞免疫荧光化学方法定性和Western-Blot定量检测分析IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达。SPSS17.0统计软件处理如果p<0.05表示差异有显著意义。
　　结果：
　　1.FSHR蛋白免疫细胞化学染色是鉴定颗粒细胞的特异性标记物，FSHR阳性染色定位于细胞胞浆和细胞膜，呈绿色荧光，细胞核呈蓝色荧光，镜下可见FSHR的阳性率大于95%；
　　2.RT-PCR法扩增出IRS-1的片段大小为134bp，real-time PCR分析结果显示添加Met对PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA表达显著下调，与阳性及阴性对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)；
　　3.细胞免疫荧光化学检测IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白阳性表达定位在颗粒细胞细胞质；
　　4.Western-blot检测Met作用24h后卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达下调，差异有统计学意义(p<0.05)，灰度值分析结果显示PCOS组卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达高于非PCOS组，添加Met组作用24h后PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达较非PCOS组显著性下降(p<0.05)。
　　结论：
　　1、FSHR蛋白免疫荧光化学染色阳性率大于95%，卵泡液分离黄素化颗粒细胞培养的纯度达到95%以上。
　　2、PCOS患者卵巢颗粒细胞IRS-1及其磷酸化表达上升。
　　3、Met降低PCOS患者卵巢颗粒细胞IRS-1及其磷酸化的表达。

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综述: 多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗的治疗进展

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