蛋鸡钙磷转运体表达的影响因素研究

摘要

钙磷是蛋鸡健康发育的必要矿质元素，在蛋鸡骨骼发育和蛋壳形成中有不可或缺的作用。本课题以蛋鸡体内主要的钙磷转运体CaBP-D28k、PMCA1b、NPt2a和NPt2b为研究靶点，对其时空表达规律、影响因素以及与蛋壳品质的关联进行研究，为更清晰认识蛋鸡钙磷转运奠定基础。 研究一 蛋鸡钙磷相关转运体的时空表达规律 试验采集海兰褐蛋鸡1、4、6、12、18、20、28、80周龄样品。结果表明，血钙浓度随生长明显上升（P<0.0001），血液ALP水平随生长不断降低（P<0.0001）。十二指肠、空肠和回肠CaBP-D28k蛋白产蛋前18周几乎不表达，开产后迅速升高，产蛋期表达量最高（P<0.0001），80周龄表达下降。各肠段PMCA1b蛋白表达以育雏期和产蛋期最高，育成期表达最低（P<0.0001）。肾脏CaBP-D28k和PMCA1b蛋白表达整体变化不大，育雏期和产蛋期表达水平要高于育成期（P＜0.05）。小肠各肠段育雏期和产蛋期NPt2b蛋白表达显著高于育成期（P＜0.05）。肾脏NPt2a mRNA表达随生长不断上升，产蛋期表达量最高（P<0.0001），并在产蛋末期有所降低。 研究二 日粮有效磷对钙磷相关转运体表达的影响 选择30只23周龄的海兰褐蛋鸡，随机将其分为3个处理，低磷处理饲喂0.15%AP的日粮，对照处理饲喂0.41%AP的日粮，高磷处理饲喂0.82%AP的日粮。结果显示，日粮磷含量不影响蛋品质（P > 0.05）。与对照组相比，高磷显著上调血磷和血液 ALP水平（P＜0.05），低磷日粮处理明显降低血磷（P＜0.05），日粮磷含量对血钙浓度无影响（P＞0.05）。对照组十二指肠CaBP-D28k和PMCA1b蛋白表达显明显于空肠和回肠（P < 0.05），空肠CaBP-D28k蛋白表达亦明显比回肠高（P < 0.05），十二指肠NPt2b mRNA表达明显比其它肠段高（P＜0.05），十二指肠NPt2b蛋白表达明显比空肠高（P＜0.05）。与对照比，低磷和高磷日粮显著上调十二指肠PMCA1b mRNA表达（P＜0.05），低磷日粮显著上调回肠 CaBP-D28k和NPt2b mRNA 表达，低磷日粮显著下调蛋壳腺CaBP-D28k mRNA和十二指肠NPt2b蛋白表达（P＜0.05）。 研究三 植酸酶对小肠钙磷相关转运体表达的影响 试验选用15周龄育成期伊莎褐蛋公鸡50只随机分为5个处理，对照组饲喂0.4%有效磷正常日粮，试验组饲喂补充植酸酶的0.2%有效磷日粮，试验第10天将Cr2O3作为外源指示剂按0.5%的比例添加至各组饲料。结果表明，与对照组比，植酸酶A、C、D组血磷水平显著低于对照组（P < 0.05），血液Ca、ALP无差异。对照组中，食糜钙磷消失率从十二指肠到回肠明显升高（P＜0.05），而植酸酶处理组空肠和回肠钙磷消失率无差异（P＞0.05），植酸磷消失率各肠段无差异（P＞0.05）。对照组各肠段CaBP-D28k蛋白表达无差异（P＞0.05），十二指肠PMCA1b蛋白表达水平明显比其它肠段高（P＜0.05），十二指肠NPt2b蛋白表达显著比回肠高（P < 0.05）。添加植酸酶能够显著抑制十二指肠CaBP-D28k蛋白表达（P＜0.05），并促进回肠PMCA1b蛋白的表达（P＜0.05），对小肠NPt2b蛋白表达影响不大。 研究四 环境温度对钙磷相关转运体表达的影响 选用13周龄伊莎褐蛋鸡360只，分为22、24、26、28、30oC五个温度处理，每天处理8小时（10:00-18:00），之后环境温度恢复到22oC，正常饲喂至18周龄后进行样品采集。结果显示，温度处理对血液Ca、P、ALP无显著影响（P＞0.05）。24oC～26oC小肠各肠段CaBP-D28k和PMCA1b mRNA和蛋白表达水平显著高于其它温度（P＜0.05），此外30oC还能促进小肠CaBP-D28k mRNA、PMCA1b mRNA和蛋白表达（P＜0.05）。24oC和30oC能促进肾脏CaBP-D28k mRNA表达（P＜0.05），22oC和30oC能促进肾脏PMCA1b蛋白表达。26oC～30oC最适合小肠NPt2b mRNA表达（P＜0.05），22oC～28oC最适合小肠NPt2b 蛋白表达（P＜0.05）。24oC～26oC肾脏NPt2a mRNA表达高于其它温度（P＜0.05）。 研究五 蛋壳品质与钙磷转运体表达之间的关联性 试验挑选出低蛋壳品质蛋鸡和正常蛋壳品质蛋鸡各 20 只，对其进行采样分析。结果表明，低蛋壳品质组蛋重、蛋壳厚度、蛋壳硬度显著低于正常蛋壳品质组（P＜0.05）。两组血液Ca、P、ALP无显著差异（P > 0.05）。低蛋壳品质组只有回肠PMCA1b蛋白显著低于正常蛋壳品质蛋鸡组（P＜0.05），其它小肠、肾脏和蛋壳腺钙磷转运体表达无差异。 综上所述，蛋鸡小肠和肾脏钙磷转运体主要在育雏期和产蛋期表达，十二指肠钙磷转运体表达比空肠和回肠高，但各肠段钙磷吸收能力相似。植酸酶主要在十二指肠分解植酸磷，并能抑制十二指肠CaBP-D28k表达；日粮磷水平主要影响钙磷转运体mRNA水平的表达；最有利于小肠CaBP-D28k、PMCA1b和肾脏NPt2a表达的温度是24oC～26oC， 22oC～28oC最有助于小肠NPt2b蛋白表达，22oC和30oC最有利于肾脏钙转运体表达；蛋壳品质下降可能与回肠PMCA1b表达下降有关，具体机制有待进一步探究。

目录

声明

英文缩略词表

1 前言

1.1钙磷对蛋鸡的重要作用

1.2 钙磷的吸收

1.3 影响钙磷转运的因素

1.4 蛋壳品质与钙磷转运的关系

1.5 研究的目的及意义

2 材料与方法

2.1 主要试剂和仪器

2.2 试验动物

2.3 试验设计

2.4测定指标及方法

2.5 数据分析

3 结果与分析

3.1 试验一 蛋鸡钙磷相关转运体的时空表达规律

3.2 试验二 日粮有效磷对钙磷相关转运体表达的影响

3.3 试验三 植酸酶对小肠钙磷相关转运体表达的影响

3.4 试验四 环境温度对钙磷相关转运体表达的影响

3.5 试验五 蛋壳品质与钙磷转运体表达之间的关联性

4 讨论

4.1 钙磷转运体的生长发育规律

4.2 不同肠段钙磷转运体表达水平和钙磷吸收水平

4.3 生产中影响钙磷转运体的因素

4.4 蛋壳品质与钙磷转运体的关联

5结论

6 课题创新与研究展望

6.1 课题创新

6.2 研究展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表论文情况