鸡传染性贫血病毒与新城疫弱毒疫苗LaSota株对SPF鸡的协同致病作用

摘要

鸡传染性贫血病（Chicken infectious anemia，CIA）是由鸡传染性贫血病毒（Chicken infectious anemia virus，CIAV）感染引起的一种免疫抑制性疾病，感染鸡群临床上主要表现为贫血等症状，目前已经在全球主要养禽国广泛分布和流行，给养禽业造成的损失日益增加，并逐步发展成为了一个全球性的问题。CIAV的传播方式主要包括水平传播和垂直传播，但是作为在禽弱毒疫苗中常见的外源病毒之一，使用了污染CIAV的弱毒疫苗也是一种非常重要的传播途径。此前我们观察到低剂量的CIAV在弱毒疫苗中的污染也可以引起非常典型的CIAV发病症状，而同等剂量的CIAV直接攻毒却几乎观察不到任何明显症状，我们利用系统的动物实验证实疫苗中污染的CIAV与疫苗毒株发挥了协同致病作用，但是疫苗污染是小概率事件极少发生。本研究中，某养殖场在免疫了新城疫弱毒疫苗后出现了典型的贫血症状，而尚未免疫新城疫弱毒疫苗的鸡群却并未表现出典型症状，这是否与鸡群中存在CIAV的感染和流行有关？新城疫弱毒疫苗的免疫是否会增强CIAV感染的致病性？本研究在对发病鸡群开展流行病学调查基础上通过系统的动物实验证实了CIAV感染与新城疫弱毒疫苗免疫对鸡的协同致病作用。 某养殖场部分雏鸡在免疫新城疫弱毒疫苗之后出现了CIAV的临床症状，没有免疫弱毒疫苗的鸡群CIAV的发生率反而比较低。针对此现象，我们首先通过Real-time PCR、PCR结合核酸斑点杂交以及RAA三种检测方法对此养殖场送检的不同原种品系鸡群的240份血样以及240份父母代鸡群血样进行CIAV等垂直传播性病毒的流行病学调查。调查结果显示B系鸡群60份血样中有1个CIAV阳性，阳性率为1.7%；C系60份血样中有4个CIAV阳性，阳性率为6.7%；D系60份血样中有14个CIAV阳性，阳性率为23.3%；E系60份血样中有3个CIAV阳性，阳性率为5%；240份父母代鸡群血样中有14个CIAV阳性，阳性率为5.8%。总计有36份血样为CIAV阳性，总体阳性率为7.5%，表明此养殖场不同品系鸡群中均存在CIAV的流行。据此推测感染CIAV的鸡群免疫LaSota疫苗后能够促进CIAV在体内的复制和增殖，使鸡群表现出更典型的临床症状。为此我们通过系统的动物实验观察了感染CIAV的SPF鸡接种LaSota疫苗后的相互作用。随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种CIAV模拟CIAV通过垂直传播途径感染，同时选取等量SPF鸡胚通过相同方式接种生理盐水作为对照。待孵化出雏后，于接毒组和对照组各取20只SPF鸡于7日龄免疫新城疫IV系弱毒疫苗（LaSota株），同时各组其余鸡以相同方式接种等量PBS作为对照，监测记录出壳后死亡率、1-6W体重以及红细胞数值的变化；1-6W定时采集雏鸡的抗凝血进行核酸提取，检测CIAV的病毒血症水平；每周定时采集雏鸡抗体血检测新城疫抗体水平，分析其抗体水平的变化；3W和6W剖检部分鸡只采集脾脏、胸腺、法氏囊测定其免疫器官指数情况等指标。结果显示，相比于其它组，感染CIAV并免疫LaSota疫苗组的死亡率增加、体重下降明显、红细胞数量显著减少、新城疫的抗体滴度降低且CIAV的病毒载量明显升高。上述结果表明，CIAV与新城疫弱毒疫苗LaSota株在鸡体内发生了协同致病作用，这种作用不但会影响新城疫弱毒疫苗的免疫效果，更增强了CIAV的致病性，给养殖业造成了巨大的经济损失。

目录

声明

符号说明

1前言

1.1鸡传染性贫血病毒病原学研究

1.1.1 CIAV的发现与命名

1.1.2 CIAV的形态学及理化性质

1.1.3 CIAV的基因组结构及编码蛋白特性

1.2鸡传染性贫血病毒流行病学

1.2.1发生与分布

1.2.2宿主

1.2.3传播

1.3鸡传染性贫血病毒发病机理

1.4鸡传染性贫血病毒病理变化

1.5 CIAV的诊断技术

1.5.1临床诊断

1.5.2病例剖检诊断

1.5.3病原学诊断

1.5.4血清学诊断

1.5.5分子生物学诊断

1.6 CIAV的预防和控制

2 材料与方法

2.1试验材料

2.1.1毒株

2.1.2疫苗

2.1.3 质粒

2.1.4主要试剂以及仪器

2.1.5其它主要试剂的配置

2.2 不同方法检测鸡群中鸡传染性贫血病毒的感染情况

2.2.1发病鸡群背景及样品来源

2.2.2 血液核酸提取

2.2.3 应用Real-time PCR检测鸡群中CIAV感染

2.2.4 应用PCR结合核酸斑点杂交检测鸡群中CIAV感染

2.2.5 应用RAA方法检测鸡群中CIAV感染

2.3 CIAV与新城疫弱毒疫苗LaSota株对SPF鸡的协同致病作用

2.3.1 CIAV-SDLY08毒株的增殖与定量

2.3.2动物实验设计

2.3.3体重及免疫器官指数的情况

2.3.4血细胞分析仪检测鸡红细胞数目的变化

2.3.5应用血凝抑制实验检测新城疫(NDV)抗体

2.3.6 Real-time PCR检测血液中CIAV的病毒载量

3结果

3.1 不同方法检测鸡群中鸡传染性贫血病毒的感染情况

3.1.1 Real-time PCR检测结果

3.1.2 PCR结合核酸斑点杂交检测结果

3.1.3 RAA方法检测结果

3.2 CIAV与新城疫弱毒疫苗LaSota株对SPF鸡的协同致病作用

3.2.1不同组SPF鸡的死亡率

3.2.2不同组SPF鸡体重差异

3.2.3不同组SPF鸡免疫器官指数差异

3.2.4不同组SPF鸡红细胞数目的差异

3.2.5不同组SPF鸡新城疫抗体的差异

3.2.6不同组SPF鸡CIAV病毒载量的差异

4讨论

5结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况