新型天蚕素A-马盖宁杂合肽破损耐甲氧西林金黄色葡萄球菌细胞膜的机制研究

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目的：
　　研究新型天蚕素A-马盖宁杂合肽破损临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的机制，为临床应用天蚕素A-马盖宁杂合肽对抗MRSA的感染奠定基础。
　　方法：
　　1采用微量肉汤稀释法测定天蚕素A-马盖宁杂合肽对MRSA的最小抑菌浓度（MIC）；
　　2通过电位测定仪测定天蚕素A-马盖宁杂合肽作用于MRSA后细菌细胞膜表面电位的变化；通过十六烷吸附试验计算细菌吸附率来判断杂合肽对细菌细胞膜表面疏水性的影响；
　　3采用薄膜水化法制备磷脂模拟细菌细胞膜后与天蚕素 A-马盖宁杂合肽作用；通过荧光/化学发光分析仪检测天蚕素A-马盖宁杂合肽作用后脂质体内荧光素的泄露率；通过加入空白脂质体前后异硫氰酸荧光素（FITC）标记肽的荧光光谱的变化来观察 FITC-肽是否能够使脂质体破裂；使用荧光/化学发光分析仪检测 FITC-肽与荧光淬灭剂丙烯酰胺溶液相互作用后荧光强度的变化来判断脂质体是否能保护杂合肽免受荧光淬灭剂的淬灭；
　　4通过联合药敏实验观察天蚕素A-马盖宁杂合肽对细菌细胞外膜渗透性的影响；
　　5通过β-半乳糖苷酶实验观察天蚕素A-马盖宁杂合肽对细胞质膜渗透性的影响；
　　6采用原子吸收光谱仪检测天蚕素A-马盖宁杂合肽对细菌细胞外K+的浓度的影响；
　　7通过透射电子显微镜观察天蚕素A-马盖宁杂合肽作用于MRSA后细菌细胞膜的变化；
　　8流式细胞仪分析天蚕素A-马盖宁杂合肽作用于MRSA后细菌细胞膜完整性的变化。.
　　结果：
　　1天蚕素A-马盖宁肽对MRSA的最小抑菌浓度为64μg/mL；
　　2天蚕素A-马盖宁杂合肽与带负电的MRSA相互作用使其细胞表面电位由-0.95增加到-0.50；MRSA细胞表面吸附率由2.97％增加到9.22%；
　　3天蚕素A-马盖宁杂合肽作用脂质体后，随着该杂合肽作用浓度的增强，脂质体荧光素的泄漏率增加；当加入空白脂质体后，FITC基团最大荧光强度的波长从550.4nm变为536.2nm，同时荧光强度增强；荧光淬灭剂作用于FITC-肽时，加入空白脂质体之后，FITC-肽的荧光强度降低被抑制；
　　4天蚕素 A-马盖宁杂合肽分别与利福平、红霉素，米诺环素的分级抑制指数均<0.5，表现为协同作用；
　　5随着天蚕素A-马盖宁杂合肽作用时间的延长，MRSA菌液的OD405吸光值升高；
　　6天蚕素A-马盖宁杂合肽作用于MRSA后细胞外的K+浓度升高；
　　7随着天蚕素A-马盖宁杂合肽作用时间的延长MRSA细胞膜破裂，MRSA细胞内的物质渗出到细胞外，甚至引起拟核消失；
　　8天蚕素A-马盖宁杂合肽引起荧光染料碘化丙啶（PI）流入MRSA细胞内，PI着染阳性细胞比率增高。
　　结论：
　　通过实验研究得出新型天蚕素 A-马盖宁杂合肽对 MRSA细胞膜有一定的渗透作用，最终导致细胞膜的破损。

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作者
于龙魅;
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作者单位

宁夏医科大学;

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授予单位宁夏医科大学;
学科临床检验诊断学
授予学位硕士
导师姓名王秀青;
年度 2015
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类药理学;
关键词
新型天蚕素A-马盖宁; 杂合肽; 临床分离; 甲氧西林金黄色葡萄球菌; 细胞膜; 渗透作用;

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