幽门螺旋杆菌CagA蛋白对胃黏膜上皮细胞内β-Catenin表达及磷酸化的影响

摘要

目的：
　　1.观察幽门螺旋杆菌感染对人胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达及磷酸化的影响。
　　2.明确CagA蛋白对人胃黏膜上皮细胞β-Catenin的表达及磷酸化的影响。
　　3.探讨CagA蛋白诱导胃黏膜上皮细胞内β-Catenin表达增加的分子机制。
　　方法：
　　1.收集胃窦黏膜活检标本80例，切片观察胃黏膜的病理变化；
　　2.免疫组化染色观察胃黏膜组织中的HP感染状况：所有胃黏膜标本切取6um厚的组织切片，标本经脱蜡、水化后，采用HP特异抗体检测胃黏膜组织中HP的感染状况，根据有无HP感染，所有标本分为HP阳性组及HP阴性组。
　　3.PCR扩增观察HP阳性胃黏膜组织中HP的CagA基因状态所有HP阳性的胃黏膜标本分别切取6-8张6um厚的组织切片，放入消毒的EP管中，采用Qiagen公司的试剂盒，从石蜡包埋组织中提取DNA，并以此DNA作为模板，采用CagA特异的引物扩增CagA基因,扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳分析。HP阳性胃黏膜又被进一步分为CagA阳性组与CagA阴性组。
　　4.免疫组化染色观察胃黏膜上皮细胞中β-Catenin及p-β-Catenin的表达及分布，采用半定量及定量方法，分析不同CagA状态的HP感染对胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达、分布及磷酸化的影响。
　　5.采用细胞培养及基因转染实验探讨CagA蛋白诱导胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高的分子机制。
　　结果：
　　1.HP感染诱导人胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高。
　　2.HP感染诱导的胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高与CagA基因的状态有关，CagA阳性的HP感染使胃黏膜上皮内β-Catenin的磷酸化减少。
　　3.CagA蛋白可能通过抑制PAR1b/MARK2激酶活性,导致β-Catenin的磷酸化降低。
　　结论：
　　1.幽门螺旋杆菌感染可诱导人胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增加。
　　2.HP诱导的胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的表达增高与CagA蛋白的状态密切相关，CagA蛋白抑制胃黏膜上皮细胞内β-Catenin的磷酸化。
　　3.CagA蛋白可能是通过抑制PAR1/MARK2激酶的活性，导致胃黏膜上皮细胞内β-Catenin磷酸化水平降低。

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前言

第一部分 幽门螺旋杆菌CagA蛋白对胃黏膜上皮中β-Catenin表达及磷酸化的影响

材料与方法

1. 资料和标本采集

2方法

结果

1. HP感染对β-Cat表达、分布及磷酸化的影响

2. 定量分析HP感染对胃黏膜上皮内β-Cat表达及磷酸化的影响

3. PCR扩增检测HP阳性胃黏膜组织中 CagA 基因的状态

4. CagA蛋白对胃黏膜上皮内β-Cat表达、分布及磷酸化的影响

5. 定量分析CagA状态对胃黏膜上皮内β-Cat磷酸化的影响

讨论

第二部分 幽门螺旋杆菌CagA蛋白通影响细胞内β-cat表达的分子机制探讨

材料与方法

1.主要试剂：

2.主要仪器：

3. 常规试剂配制

4.方法

结果

1. CagA促进AGS胃癌细胞内β-Cat的表达，并抑制其磷酸化

2. PAR1/ MARK降低β-Cat的表达，促进其磷酸化

3. PAR1/ MARK抑制CagA对β-Cat表达及磷酸化的作用

讨论

结论

参考文献

文献综述:CagA蛋白与β-Catenin的磷酸化

致谢

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