针砂马准灸治疗兔KOA血清对软骨细胞增殖及uPA系统影响的研究

摘要

目的研究回医针砂马准灸治疗兔膝骨性关节炎（Knee osteoarthritis，KOA）血清对体外培养兔膝关节软骨细胞增殖及尿激酶型纤溶酶原激活物（urinary-type plasminogen activator，uPA）、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体（urinary-type plasminogen activator receptor，uPAR)、尿激酶型纤溶酶原激活剂抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）表达的影响，探寻针砂马准灸对KOA治疗的作用机制。 方法 选取15只健康的六月龄新西兰大耳兔（体重：2.5±0.25Kg），随机分成三组，分别是正常组、KOA模型（模型）组和针砂马准灸（针砂）组，5只为一组。除正常组外均造KOA模型，右后肢膝关节伸直位进行石膏固定6周。造模结束后，针砂组右膝关节（髌骨上缘 2cm~髌骨下缘 2cm）部位进行针砂马准灸治疗；模型组与正常组只固定而不予任何干预。治疗三个疗程后腹主动脉取血，提取血清配成完全培养基并分组，将实验组分为正常血清组、模型血清组和针砂血清组。取四周龄幼兔（体重：约500g）膝关节软骨细胞，选择第Ⅱ代细胞作为实验细胞。MTT 检测细胞增殖能力；实时荧光定量PCR（Quantitative Realtime PCR，qPCR）检测各组细胞中uPA、uPAR及PAI-1mRNA表达；Western Blot检测各组细胞中uPA、uPAR及PAI-1蛋白表达。所得最终实验数值采用SPSS20.0统计学软件分析。 结果 1.软骨细胞鉴定结果表明：提取的细胞经鉴定为软骨细胞。 2.MTT 检测结果表明：24h 与 48h 检测结果一致，正常血清组细胞增殖率分别为1.03±0.17、1.00±0.05；与正常血清组相比，模型血清组细胞增殖率（24h：0.54±0.05；48h：0.47±0.05）显著降低（P<0.05）；与模型血清组相比，针砂血清组细胞增殖率（24h：0.89±0.07；48h：0.84±0.06）显著增高（P<0.05）。 3.qPCR检测结果表明：与正常血清组相比，模型血清组细胞中uPA、uPARmRNA表达显著增高（P<0.05）；与模型血清组相比，针砂血清组细胞中 uPA、uPARmRNA表达显著减少（P<0.05）。与正常血清组相比，模型血清组细胞PAI-1mRNA表达无统计学差异（P>0.05）；与模型血清组相比，针砂血清组细胞中PAI-1mRNA表达显著增高（P<0.05）。 4.Western Blot检测结果表明：与正常血清组相比，模型血清组细胞中uPA、uPAR蛋白表达显著增高（P<0.05）；与模型血清组相比，针砂血清组细胞中uPA、uPAR蛋白表达显著减少（P<0.05）。与正常血清组相比，模型血清组细胞PAI-1蛋白表达无统计学差异（P>0.05）；与模型血清组相比，针砂血清组细胞中PAI-1蛋白表达显著增高（P<0.05）。 结论 针砂马准灸血清可促进软骨细胞增殖；针砂马准灸血清可通过软抑制软骨细胞uPA、uPAR的表达，增强PAI-1的表达，发挥对KOA的治疗作用。

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