人天然Fab噬菌体抗体库的构建

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目的：采用噬菌体抗体库这一新兴生物学技术，构建天然人源Fab抗体库。方法：收集未免疫的健康人外周血分离淋巴细胞，提取总RNA后逆转录获得cDNA，通过PCR扩增抗体重链和轻链基因片段，回收700bp左右的目的基因片段，将基因片段连接到噬菌体pComb3中，将构建的重组噬菌体载体pComb3电穿孔转化感受态细胞XL1-Blue构建轻链文库，随后将重链基因经XhoI和SpeI双酶切后连到轻链质粒文库中，将构建的重组噬菌体载体电转化XL1-Blue，经辅助噬菌体VCSM13超感染，构建非免疫人源Fab噬菌体抗体库。结果：经过轻链和重链基因的重组和转化，获得库容量为1.26×1011pfu/ml的Fab噬菌体抗体库。结论：本研究构建的人天然噬菌体抗体库为进一步筛选特异性抗体提供基础，也是分子生物学实验方法的-个探索与尝试。为今后筛选制备抗体提供了技术平台和思路，有望为后续获得多种有高潜在中和活性的人源抗体打下一定的基础。

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作者
王丽蓉;
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作者单位

内蒙古医科大学;

内蒙古医学院;

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授予单位内蒙古医科大学;内蒙古医学院;
学科免疫学
授予学位硕士
导师姓名沈敬华;
年度 2009
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫分子遗传学;
关键词
噬菌体抗体库; Fab抗体; 分子生物学; 人源抗体;

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