葡萄籽原花青素与阿托伐他汀对兔动脉粥样硬化一级预防的实验研究

摘要

背景 动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是一种严重危害老年人生命和健康的重大疾病，也是心脑血管疾病的重要病理基础。它是发达国家人口死亡的主要原因，在发展中国家发病率和死亡率也越来越高，因此动脉粥样硬化的发病机制和抗动脉粥样硬化药物越来越成为研究的热点。国内外多数研究认为，动脉粥样硬化发展是一个复杂过程，其中心环节是低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)沉积在血管壁，随之氧化修饰，炎症细胞聚集、侵入和激活，导致动脉粥样硬化的产生。葡萄籽原花青素(grapeseedproanthocyanidinextract，GSPE)是从葡萄籽中提取出来的一类多酚化合物，它具有极强的抗氧化等活性，因此GSPE极有可能在动脉粥样硬化的一级预防过程中发挥重要作用。他汀类药物属于羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，它可以阻断HMG-CoA转变为mevalonic(甲羟戊酸)从而显著减少胆固醇的合成。该类药物调脂作用强，且具有与抗氧化、抗炎、稳定易损斑块等相关的不依赖于胆固醇降低的心血管保护作用。大规模临床试验已经证明他汀类药物在动脉粥样硬化的一二级预防中发挥了重要作用。我们通过建立动脉粥样硬化动物模型，观察GSPE与阿托伐他汀单用和联合应用对动脉粥样硬化的一级预防作用，旨在开发GSPE与阿托伐他汀在动脉粥样硬化防治中的应用新领域。 目的 通过实验性高脂血症的动物模型观察GSPE与阿托伐他汀在动脉粥样硬化一级预防中的作用，并对其机制加以探讨。 (1)分别观察GSPE以及阿托伐他汀对兔血清脂质的影响。 (2)分别观察GSPE以及阿托伐他汀对兔血清脂质过氧化的影响。 (3)观察阿托伐他汀与GSPE联合应用对血清脂质水平和过氧化的影响。 (4)通过对兔主动脉、心和脑标本的肉眼观察、电镜观察以及免疫组织化学观察，了解GSPE和阿托伐他汀及联合应用对兔动脉粥样硬化的一级预防作用。 方法 (1)建立模型和实验分组：40只雄性新西兰白兔，分笼喂养，饮水不限，饲料量为每只每天100-120g。观察一周后进入实验。随机分为5组，共饲喂12周： 空白对照组(A组)8只：饲喂标准颗粒饲料； 动脉粥样硬化模型组(B组)8只：饲喂含1％胆固醇的颗粒饲料； GSPE组(C组)8只：饲喂含1％胆固醇和1％GSPE的颗粒饲料； 阿托伐他汀组(D组)8只：饲喂含1％胆固醇和阿托伐他汀2.5mg/kg/d的颗粒饲料； GSPE+阿托伐他汀组(E组)8只：饲喂含1％胆固醇、阿托伐他汀(2.5mg/kg/d)和1％GSPE的颗粒饲料。 (2)标本的采取：各组兔分别于实验开始前1天及实验开始后的第4、8、12周末，于清晨空腹称重后，经耳中动脉采血，测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)以及丙二醛(MDA)。并在12周末气栓法处死所有动物，留取主动脉、心、脑作形态学、电镜观察和免疫组织化学检查。 (3)测定方法：血清TC、TG、HDL-c和LDL-c含量应用日立7170型全自动生化分析仪测定。血清MDA含量按试剂盒说明分别对高脂和正常血脂标本进行测定。主动脉、心、脑标本分别应用光镜和透射电镜观察并拍照，并对主动脉CD68和α-actin进行免疫组织化学染色。 (5)统计学处理：各项测定值均以均数±标准差((-x)±s)表示，应用SPSS10.0统计分析系统，多组间差异比较用ANOVA检验和析因设计方差分析，方差不齐者用秩和检验，个体前后变化使用配对t检验。双侧p＜0.05为有显著差异。 结果 与对照组及模型组相比： (1)GSPE对兔血脂无明显影响(P＞0.05)，而阿托伐他汀可明显降低血浆LDL-c、TC、TG，升高HDL-c(P＜0.05)，二者合用无交互作用。 (2)GSPE和阿托伐他汀均可显著降低血清MDA水平(P＜0.05)，二者联用存在相互协同作用。 (3)GSPE和阿托伐他汀均明显减轻了兔动脉粥样硬化的病变程度，增加了斑块的稳定性，减少了斑块面积，减轻兔实验性AS病变程度，且二者联用效果较二者单用更佳。 结论 1.GSPE对兔血清脂质的影响并不显著；但可明显降低兔体内的脂质过氧化水平。 2.GSPE具有延缓兔实验性动脉粥样硬化病变发生的效应，减少动脉粥样斑块面积，这一作用主要与其清除自由基及减轻脂质过氧化损伤有关。 3.阿托伐他汀可显著降低兔血清脂质水平，明显降低兔体内脂质过氧化水平。 4.阿托伐他汀也具有延缓兔实验性动脉粥样硬化发生的作用，使斑块面积减少，病变程度减轻，其作用与其调节血脂水平及抗氧化等作用有关。 5.阿托伐他汀和GSPE联合应用后，既能调节兔血脂水平，又能发挥协同作用显著减少氧化反应的发生，从而明显减轻动脉粥样硬化斑块的发生，其疗效明显优于单用GSPE以及阿托伐他汀，这可能为今后临床用药提供实验依据。

目录

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前 言

1材料方法

2结 果

3讨 论

创新性及其展望、限制性及不足

结 论

附表与附图

参考文献

致 谢

攻读学位期间发表的学术论文