AdA-fos转表达对卵巢癌细胞株3AO/DDP顺铂耐药性逆转作用的研究

摘要

目的：探讨AdA-FOS对体外培养的卵巢癌细胞3AO/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制，为临床逆转卵巢癌多药耐药性提供新的治疗靶点和实验依据。 方法：本研究将含有突变型AdA-fos基因的质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细菌，选取特异引物PCR扩增阳性的克隆进行检测鉴定，将检测确认的大肠杆菌克隆进行摇菌、质粒抽提并纯化、定量，命名为PCDNA3.1/AdA-fos。以Fugene6类脂质体转基因试剂介导将PCDNA3.1/AdA-fos转染体外培养的卵巢癌耐药细胞株3AO/DDP作为实验组，转染空载体PCDNA3.1的卵巢癌耐药细胞株3AO/DDP及单纯的3AO/DDP细胞株分别作为空载体对照组及空白对照组。RT-PCR及DNA琼脂糖凝胶电泳法分析外源基因的表达；将以上各组细胞分别加入DDP，倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化；DNA琼脂糖凝胶电泳法对细胞凋亡情况进行检测；抗单链DNA(ssDNA)单克隆抗体(mAb)免疫组织化学法检测转染AdA-fos后DDP对3AO/DDP细胞凋亡的诱导作用，并根据凋亡率判断AdA-fos转染对3AO/DDP细胞耐药的逆转作用。 结果：应用Fugene6类脂质体将真核表达载体PCDNA3.1/AdA-fos成功地转染3AO/DDP细胞。经RT-PCR及DNA琼脂糖凝胶电泳分析证实AdA-fos转染后在3AO/DDP细胞中有AdA-fos基因表达；在DDP的作用下，耐药卵巢癌细胞3AO/DDP增殖活性明显受到抑制；耐药细胞出现包括凋亡小体、梯形电泳条带等典型的凋亡征象，凋亡率为45.71％，明显高于对照组，P＜0.005，有统计学意义。 结论：在体外AdA-fos基因转染能通过抑制AP-1与DNA的结合逆转卵巢癌耐药细胞对DDP的耐药性，增加耐药细胞对DDP的敏感性。抑制其增殖，诱导其凋亡。AP-1是逆转卵巢癌细胞顺铂耐药性的一个重要的治疗靶点。

目录

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表学术论文目录