子痫前期孕妇血清中胎儿游离DNA水平的研究

摘要

目的： 探讨孕妇血清中胎儿游离DNA水平的检测在子痫前期病因及诊断中的应用价值。检测子痫前期患者血清中胎儿游离DNA的含量与正常孕妇进行比较，有助于对子痫前期病因的研究；对轻、重度子痫前期患者血清中胎儿游离DNA水平的比较则可能有助于子痫前期病情进展的观察，并且可能有助于预测子痫的发生。 方法： 607例行产前检查的孕妇，56例进展为子痫前期，其中30例经B超确定所妊娠为男性胎儿的孕妇(分娩后证实为男婴)为子痫前期组，参照第六版《妇产科学》妊娠期高血压疾病的诊断标准，轻度子痫前期组14例、重度子痫前期组16例、合并HELLP综合征(hemolysis，elavated serum level of liverenzymes，and low platelets)10例。另选择30例经B超确定所妊娠为男性胎儿的正常孕妇(分娩后证实为男婴)为对照组。10例经B超确定所妊娠为女性胎儿的孕妇(分娩后证实为女婴)作为阴性对照。用普通试管各抽取孕妇平均孕20周、孕晚期(子痫前期组孕33周，对照组孕34周)空腹外周血3ml，离心取血清。用QIAamp DNA B100d Mini Kit提取母体血清中总的游离DNA。采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测各组血清标本中目的基因SRY(Y染色体上的性别决定基因)及内参照β-actin基因的表达，读取Ct值(cyclethreshold)。将子痫前期组和对照组Ct值样本均数进行统计学分析，若差异具有统计学意义(P<0.01)，再运用2<'-△△Ct>公式法进行相对定量，2<'-△△Ct>=子痫前期组目的基因SRY相对于对照组目的基因SRY表达的倍数，即子痫前期孕妇血清中胎儿游离DNA相对于正常孕妇的倍数。 结果： 1．孕妇血清中DNA的纯度： 用QIAamp DNA Blood Mini Kit抽提的孕妇外周血清中游离DNA，采用紫外分光光度计进行纯度测定，绝大多数标本的DNA纯度较高，A260/280比值在1.6～1.8之间。 2．普通PCR扩增目的基因SRY和内参照基因β-actin的琼脂糖电泳结果：SRY的扩增产物为136bp，β-actin的扩增产物为101bp，无引物二聚体，无杂带，设计的PCR引物特异性好。 3．荧光定量PCR结果： 1)该检测系统的特异性达100％，10例所妊娠为女性胎儿的孕妇血清中均未检测到SRY基因的表达；敏感性达96.7％，60例所妊娠为男性胎儿的孕妇血清中有58例可以检测到胎儿游离DNA。 2) 孕20周母体血清中胎儿游离DNA水平的检测： 子痫前期组和对照组样本均数进行两样本间的t检验，差别有统计学意义(P<0.01)。轻、重度子痫前期及合并HELLP综合征的样本均数间进行q检验：轻、重度之间及轻度与合并HELLP综合征之间，差别均有统计学意义(P<0.01)；重度与合并HELLP综合征的差别无统计学意义(P>0.05)，可认为重度子痫前期与合并HELLP综合征孕妇血清中胎儿游离DNA水平无明显差异。子痫前期组孕妇血清中胎儿游离DNA为对照组的2.4倍，轻度子痫前期为对照组的1.9倍，重度为3.0倍，合并HELLP综合征为3.1倍。 3) 孕晚期母体血清中胎儿游离DNA水平的检测： 子痫前期组和对照组样本均数进行两样本间的t检验，差别有统计学意义(P<0.01)。轻、重度子痫前期及合并HELLP综合征的样本均数间进行q检验：轻、重度之间，轻度与合并HELLP综合征之间，重度与合并HELLP综合征之间，差别均有统计学意义(P<0.01)。子痫前期组孕妇血清中胎儿游离DNA为对照组的4.5倍，轻度子痫前期为对照组的3.8倍，重度为5.5倍，合并HELLP综合征为6.5倍。 结论 孕妇血清中存在胎儿游离DNA。子痫前期孕妇胎儿游离DNA水平明显高于同孕周的正常孕妇，且子痫前期程度越重，胎儿游离DNA升高越明显，这种的变化在孕20周即可查到。因此，孕妇血清中胎儿游离DNA水平的变化，可以作为观察子痫前期病情进展和预测子痫发生的指标并且有助于探讨子痫前期的病因、发病机制。

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讨论

结论

附图

参考文献

综述 孕妇血循环中胎儿游离DNA的研究进展

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