PPAR—γ在脑膜瘤中的基因和蛋白表达及曲格列酮对脑膜瘤细胞生长的作用的探讨

摘要

脑膜瘤是颅内高发的良性肿瘤，手术治疗是主要的治疗方法，但临床上放射治疗以及其他非手术治疗也是重要的辅助手段，因此探讨脑膜瘤新的治疗靶点也是目前研究热点之一。PPAR—γ是一种细胞核转录因子，与糖代谢调节、脂肪细胞分化相关。其配体除了具有改善胰岛素抵抗和血脂、免疫调节和抗炎作用外，还具有抗肿瘤细胞增殖和促细胞分化作用，对肿瘤细胞的转移、侵袭等生物学行为也有影响。PPAR—γ及其激活剂曲格列酮在脑膜瘤中的研究少有报道，本课题拟通过RT—PCR、免疫组化以及体外实验探讨PPAR—γ在脑膜瘤中的表达及其激活剂曲格列酮对细胞生长的影响。本课题共分为两个部分： Ⅰ PPAR—γ在脑膜瘤中的基因和蛋白表达研究 目的：探讨PPAR—γ在脑膜瘤中的基因和蛋白表达，并探讨其表达与脑膜瘤增殖指标的关系。 方法：应用RT—PCR、免疫组化的方法对48例脑膜瘤的手术标本进行研究：应用异硫氰酸胍法提取总RNA；逆转录获取cDNA，进行PCR反应并琼脂糖凝胶电泳后，凝胶成像系统定量分析。按SP免疫组化染色方法检测PPAR—γ的表达，并以增殖细胞抗原为指标检测增殖情况，采用双盲法观察其结果。 结果：非典型性组（x=0.465±0.375）明显高于良性组（x=0.766±0.481，t=7.56，P<0.01）；女性表达略高于男性（t=5.68，P<0.05）。免疫组化结果显示所有标本均有PPAR—γ表达，与良性组相比，非典型性组PPAR—γ蛋白表达较强（P<0.05），PPAR—γ蛋白表达与脑膜瘤患者的年龄、性别均无明显相关（P>0.05）。 结论：非典型脑膜瘤组PPAR—γ表达高于良性组，其表达与增殖活性成正相关。 Ⅱ曲格列酮对脑膜瘤细胞的体外实验 目的：探讨PPAR—γ激活剂曲格列酮在脑膜瘤细胞中可能的抗肿瘤作用。 方法：选取人脑膜瘤细胞16例（Ⅰ级，良性，10例；Ⅱ级，非典型性，6例）进行，应用MTT方法检测曲格列酮对脑膜瘤细胞生长的作用，应用流式细胞仪检测曲格列酮干预后肿瘤细胞凋亡情况。 结果：MTT实验显示试验组OD值均明显低于正常对照组，曲格列酮促进细胞凋亡（或死亡）与浓度有密切关系，即药物浓度越大，其OD值越小。浓度为1μmol/L的曲格列酮对体外培养的脑膜瘤细胞生长无明显影响；浓度为10或50μmol/L时的曲格列酮作用24小时后OD值低于对照组（P<0.05），72小时抑制最明显（P<0.01），120小时以后抑制作用减弱。FCM检测结果表明，脑膜瘤细胞经不同浓度的曲格列酮作用24h、48h、72h、120h的凋亡率的实验结果表明实验组与对照组之间及不同浓度组之间，有显著性差异（P<0.05）；各时间组与对照组之间及不同时间组之间也有显著性差异（P<0.05）。分析显示曲格列酮作用脑膜瘤细胞后，可明显诱导细胞凋亡，且随作用浓度和作用时间的延长，凋亡率显著增加；但在50、100μmol/L作用72h后，死亡细胞亦明显增加。 结论：浓度为10或50μmol/L时的曲格列酮作用24小时不但可以抑制脑膜瘤细胞生长而且可以诱导凋亡，72小时抑制最明显（P<0.01），120小时以后抑制作用减弱。在体外，曲格列酮影响脑膜瘤细胞生长和凋亡的作用具有浓度依赖性。

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文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

第一部分PPAR-γ在脑膜瘤中的基因和蛋白表达研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结 论

参考文献

第二部分曲格列酮对脑膜瘤细胞的体外实验

前言

材料与方法

结果

讨论

结 论

参考文献

附图

致 谢

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