硫酸软骨素与玻璃酸钠凝胶注射剂治疗骨关节炎的研究

摘要

骨关节炎（OA）是一种严重危害中老年人健康的慢性退行性骨关节病，临床上以膝关节发病最常见。随着社会人口的老龄化，该病的发病率日益上升，我国约有6000万～7000万人患不同程度的OA。硫酸软骨素（CS）是关节软骨的重要组成成分，它具有保护软骨、促进软骨基质的形成、缓解关节疼痛等多种药理作用与生理功能，体外及体内实验中显示它具有保护关节软骨的特性，临床应用中能够减轻骨性关节炎的症状。玻璃酸钠（SH）是关节滑液及软骨的重要组成成分，广泛存在于软骨多形细胞、滑膜细胞中，对关节、软骨起润滑、缓冲和屏障作用，组成和修复关节软骨。关节腔注射SH已成为OA的主要治疗方法，其能够增加关节滑液的黏弹性和润滑性，较好的改善OA，恢复滑膜和软骨基质的黏弹性，缓解炎症等。本文研究了CS对软骨细胞增生及Ⅱ型胶原合成的影响，制备了硫酸软骨素玻璃酸钠注射剂（CS—SH injection），考察了该制剂对OA．动物模型的治疗作用及其机制。主要内容如下： ⑴研究了CS对于软骨细胞增生及Ⅱ型胶原合成的影响。考察了CS对于兔膝关节软骨细胞增生及Ⅱ型胶原合成的影响。结果显示，CS对软骨细胞的增生无明显影响，且能促进Ⅱ型胶原的合成。 ⑵研究制备了硫酸软骨素玻璃酸钠注射剂（CS—SH注射剂）。制备了CS—SH注射液剂，建立了CS—SH注射剂的生产工艺。CS—SH注射液的性质稳定，质量可控。 ⑶研究了CS—SH注射剂对OA动物模型的治疗作用。采用木瓜蛋白酶诱导的兔OA模型，用CS—SH注射剂兔膝关节腔内注射，以生理盐水和SH注射液为对照。给药5周后取材，做光镜观察Mankin评分、观察关节软骨变化情况。结果发现，CS—SH治疗可显著减轻兔OA症状，其疗效好于SH治疗组。 ⑷研究了CS—SH注射剂对OA的部分作用机制。通过碱水解、蛋白酶裂解、超速离心的方法提取经CS—SH等治疗的OA模型兔关节软骨的糖胺聚糖（GAG），用天青A比色法检测GAG总量，考察治疗后关节软骨基质蛋白聚糖的变化。结果显示，CS—SH注射液可使病变关节软骨中蛋白聚糖含量增加。检测了治疗后OA模型兔关节滑液中的IL—1β、TNF—α、TIMP—1水平，结果显示CS—SH注射液可显著降低IL—1β和TNF—α的表达水平，同时提高TIMP—1的表达水平。研究还检测了治疗后OA模型兔关节滑液中的NO、iNOS的水平，发现CS—SH注射液可显著降低NO、iNOS的表达水平。 ⑸根据研究结果推测，CS—SH可能是通过促进软骨基质的合成，保护软骨细胞，降低炎性细胞因子IL—1β和TNF—α的表达水平，提高TIMP—1的表达水平，降低iNOS、NO的表达水平，进而减轻关节炎症，从而对OA产生治疗作用。 ⑹本研究取得的主要成果和结论有：①体外培养中CS能促进软骨细胞Ⅱ型胶原的合成，对于软骨细胞的增殖没有影响。②CS—SH注射液制备工艺简单，质量可控，具有良好的稳定性。③CS—SH注射液可保护关节软骨，显著改善兔OA症状，减轻炎症。④CS—SH注射液可显著降低OA模型兔关节滑液中IL—1β和TNF—α的表达水平，提高TIMP—1的表达水平，显著降低NO、iNOS的表达水平，从而对软骨蛋白聚糖的降解起延缓作用，其作用效果强于SH注射液。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

第一章 绪论

1 OA治疗的研究进展

1.1 OA的定义、分类、发病机制与病理

1.2 OA的流行病学研究

1.3 OA的治疗药物

2 CS与OA

2.1 CS简介

2.2 CS在OA治疗中的作用

3 SH与OA

3.1 SH简介

3.2 SH在OA治疗中的作用

4本课题的研究目的和研究内容

4.1 研究目的

4.2研究内容

第二章 CS体外药理作用的考察

1材料与仪器

2方法

2.1软骨细胞的原代培养

2.2软骨细胞的传代培养

2.3 WST-1试剂盒测定CS对兔软骨细胞增生的影响

2.4 Ⅱ型胶原合成的测定

2.5 CS对于软骨细胞iNOS的表达水平的影响

3 结果

3.1 CS对兔软骨细胞增生的影响

3.2 Ⅱ型胶原的表达水平的测定

3.3 iNOS在各实验组中的表达水平

第三章 CS-SH凝胶注射剂的制备

1 实验仪器与材料

2注射剂的制备

2.1 处方组成

2.2注射剂的制备工艺

2.3 CS-SH凝胶注射剂有关指标的检测

2.4 CS-SH凝胶注射剂有关指标检测结果

第四章 CS-SH凝胶注射剂治疗OA的疗效考察

1动物造模

1.1 关节制动

1.2手术方法

1.3关节腔注射

2材料

2.1 动物

2.2试剂

3方法

3.1动物分组

3.2造模方法

3.3给药方法

3.4标本的采制及检测

3.5标本观察项目及评分标准

4 结果

4.1光镜观察评分

4.2关节滑膜、软骨病理切片观察

第五章CS-SH注射剂用于OA治疗作用机制的研究

1材料与仪器

1.1 试剂

1.2试剂配制

1.3 仪 器

1.4研究材料取材

2 方法

2.1 关节软骨GAG含量测定

2.2 关节滑液中细胞因子测定

2.3 NO自由基的测定

2.4 iNOS的测定

3 结果

3.1各组动物软骨中GAG含量

3.2各组动物关节滑液中细胞因子的表达水平

3.3NO在各组动物中的表达水平

3.4iNOS在各组动物中的表达水平

4讨论

4.1 CS-SH注射剂对关节软骨基质蛋白聚糖的影响

4.2关节滑液中炎性细胞因子以及TIMP-1与OA发病的机制

4.3关节滑液中iNOS、NO与OA发病的机制

参考文献

致谢

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