美他多辛对酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1影响的研究

摘要

目的：美他多辛是在国内上市不久，专一治疗酒精性脂肪肝病药物。临床上使用美他多辛主要用于治疗酒精性脂肪肝，对其预防作用考察的不多。通过调研文献发现CYP2E1与酒精性脂肪肝密切相关，但国内未有美他多辛与CYP2E1之间联系的研究。本课题欲通过构建酒精性脂肪肝大鼠模型，研究美他多辛对酒精性脂肪肝大鼠的预防作用，并探索其作用机制，研究美他多辛与CYP2E1的关系，分析CYP2E1是否是美他多辛的治疗靶点。
　　 方法：清洁级Wistar雄性大鼠30只，体重(200±20)g，每日给予大鼠标准食物和饮用水各2次，保持光照和避光循环饲养各12h。将所有大鼠随机分为3组，分别为模型组10只，预防组10只，对照组10只。采用乙醇灌胃法建立酒精性脂肪肝大鼠模型：给予大鼠40％乙醇（剂量为乙醇8g·kg-1·d-1）灌胃，每日2次，间隔8h，至4wk末。5wk开始，将乙醇浓度增至50％(剂量为乙醇10g·kg-1·d-1)，至8wk末。对照组：不灌服乙醇，每日2次给予等体积灭菌注射用水；模型组：1～8wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同时，在每次灌服乙醇1h后给予等体积灭菌注射用水;预防组：1～8wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同时，每次灌服乙醇1h后给予美他多辛(300mg·kg-1·d-1)。给大鼠超声检查，采用全自动生化仪来检测血清指标，ELISA测定脂蛋白脂酶，HE染色观察肝组织病理学变化，油红O染色观察肝脂肪沉积，天狼星红染色染色观察肝胶原染色，蒽酮法测定肝糖原含量，肝组织免疫组化检测TNF-α、IL-6、CYP2E1的蛋白表达，蛋白印记法检测肝组织中CYP2E1蛋白含量，所得数据使用SPSS17.0统计分析软件。
　　 结果：大鼠酒精性脂肪肝模型建立成功，模型组有1只大鼠死亡，为酒精误吸入气管所致，其他组无大鼠死亡。模型组和预防组大鼠体重均有低，与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。肉眼观察对照组大鼠肝脏为鲜红色，边缘锐利，表面光滑，切面无颗粒感;模型组大鼠肝脏体积增大，呈暗黄色，切面油腻，肝包膜欠平整或呈锯齿状改变；预防组大鼠肝脏色泽比模型组浅，但较对照组略深。超声影像学显示对照组大鼠肝脏包膜光滑，回声均质，血管纹理清，肝脏大小正常；模型组大鼠超声检查示肝脏前场回声增强，后场回声衰减，亮度强，血管纹理不清，脂肪浸润。预防组大鼠超声检查示肝脏回声稍强，分布欠均匀，血管纹理较模型组显示清晰。HE、油红O、天狼猩红病理学染色显示对照组大鼠肝小叶完整，肝细胞呈多边形，围绕中央静脉呈放射状，肝窦清晰可见，肝索排列整齐，肝小叶汇管区基本结构清晰可见，肝细胞内无脂肪沉积，胶原组织少见；模型组肝细胞肿胀、气球样变，肝小叶中心脂肪液滴沉积非常严重，还可见大量红色条状胶原纤维，与对照组相比(P＜0.01)；预防组：可见有少量脂肪沉积，汇管区可见少量胶原组织。与对照组和预防组相比，大鼠酒精性脂肪肝模型组ALT、AST、TG明显升高(P＜0.01，P＜0.05)，TC表达低(P＜0.01)。肝糖原含量预防组与对照组相比明显下降(P＜0.01)，预防组大鼠肝糖原含量也低于对照组(P＜0.05)，比模型组高，但无统计学意义。酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂蛋白脂酶含量明显升高(P＜0.01)；模型组肝糖原含量下降，预防组大鼠肝糖原含量高于模型组(P＜0.01)。酒精性诱导脂肪肝后，TNF-α、IL-6水平均显著升高，与前人研究报道一致，而给予美他多辛可有效抑制TNF-α、IL-6的水平。CYP2E1免疫组化和western blot结果显示模型组表达与对照组相比增高(P＜0.05);预防组CYP2E1表达较模型组明显减少，美他多辛显著抑制了CYP2E1的表达。
　　 结论：大鼠灌服酒精8wk，经超声学检查，病理学证实乙醇灌胃造模成功，酒精性脂肪肝的发病与CYP2E1的增高密切相关，CYP2E1与多种生理因子共同参与了酒精性脂肪肝病的发生和发展。预防组CYP2E1蛋白水平表达下降，说明美他多辛有效抑制了CYP2E1的表达。CYP2E1活性减弱，有助于酒精性肝病患者的肝功能朝良性循环发展。美他多辛对大鼠酒精性脂肪肝有较好的预防作用。