拉帕替尼和Src抑制剂AZD0530联合化疗对PTEN低表达乳腺癌细胞生长的抑制作用

摘要

研究背景：针对乳腺癌发生和调节分子机制的生物靶向治疗具有高特异性和相对低的毒副反应等优点越来越受到人们的重视，是目前乳腺癌治疗领域的研究热点之一。以ErbB2为靶向的一组生物治疗，可明显提高ErbB2高表达乳腺癌患者的生存，是靶向治疗最成功的例子之一。拉帕替尼(Lapatintib)是作用于1型和2型表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)的双重酪氨酸激酶受体阻滞剂，通过抑制P13K信号传递途径，下调细胞凋亡抑制蛋白，引起肿瘤细胞的凋亡，临床试验已经证明拉帕替尼能较好的抑制肿瘤细胞的生长，可单独或联合化疗用于乳腺癌的治疗。但研究也发现，某些ErbB2高表达乳腺癌患者对单独使用ErbB2抑制剂治疗一开始就不敏感，而有些ErbB2高表达乳腺癌患者经治疗后最终敏感性也下降。因此，探讨靶向药物的耐药机制及如何克服这些耐药具有重要的临床意义。
　　 尽管对靶向药物的耐药机制很多，但靶向信号途径基因的变异或者靶向信号途径因受抑制而继发形成的代偿改变等可能是耐药形成的重要机制。10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因PTEN(Phosphatase and TensinhologyDeleted from Chromosome10)，又称多种进展期癌中病变基因(Mutated inMultiple Advanced Cancers，MMAC1)是一个具有双重磷酸酶活性的抑癌基因，具有抑制肿瘤细胞生长，促进细胞凋亡的作用。PTEN对PI3K/AKT信号途径的调节作用不仅与许多肿瘤的发生和发展有关，而且与肿瘤细胞对靶向药物的敏感性的关系也有关，这引起人们极大的兴趣。
　　 目的：探讨PTEN低表达对表皮生长因子受体抑制剂拉帕替尼治疗的影响以及联合应用Src抑制剂对增强药物敏感性的作用。
　　 方法：选择PTEN正常表达的细胞株MDA-MB-231(M231)，采用脂质体转染法将PTEN-shRNA转入表达PTEN的乳腺癌细胞内，构建PTEN基因沉默的细胞株M231-PTEN-shRNA。用拉帕替尼、Src抑制剂AZD0530及两药联用处理转染组细胞，检测PTEN低表达与药物对细胞生长和克隆形成能力影响之间的关系，并从信号途径蛋白改变初步探讨其影响机理。
　　 结果：和对照组比较，转染组细胞对拉帕替尼具有明显的耐受表现，细胞的生长和在三维立体培养中形成克隆的能力没有受到明显抑制。两组细胞中，和单独使用拉帕替尼或AZD0530比较，联合使用拉帕替尼和AZD0530后，细胞生长和克隆形成能力均受到明显抑制。Western blot显示拉帕替尼和AZD0530分别降低PTEN低表达组细胞中Akt-S473和Src-Y416的磷酸化；两药联合使用后，细胞内磷酸化的Akt-S473和Src-Y416的含量极微。
　　 结论：抑癌基因PTEN的低表达可导致乳腺癌细胞对拉帕替尼敏感性降低；联合使用Src抑制剂能明显增强对耐药细胞生长能力的抑制作用。其作用可能是通过协同抑制Akt和Src活性实现的。