BALB/c小鼠过敏反应模型的建立及在中药注射剂致敏性检测中的应用

摘要

中药注射剂（TraditionalChineseMedicineInjection，TCMI）是我国独创的新剂型，具有给药方便、生物利用度高、作用迅速等特点。但随着临床的广泛应用，其不良反应尤其是过敏反应的报道日益增多，引起社会的高度重视。TCMI成分多样，其潜在的致敏原既可能与大分子物质有关，也可能与小分子物质有关，或二者兼而有之，这都为过敏反应动物模型的建立提出更高要求。
　　 BALB/c小鼠不仅具有体积小，生长周期短，标准化生物试剂容易获取，免疫系统与人类接近等优点，而且是一种高IgE表达、倾向于Th2型反应的小鼠品系，被广泛用于过敏反应动物模型的构建。
　　 本研究以BALB/c小鼠为实验对象，尝试建立既可用于大分子物质检测，又可用于小分子物质研究的全面的BALB/c小鼠过敏反应模型，从而有效消除不同动物模型检测带来的种属差异，提高检测的准确度和可靠性。然后将建好的模型用于清开灵注射液（QingkailingInjection，QKLI）和葛根素注射液(GegensuInjection，GGSI)的致敏性研究，以期建立合适的过敏反应动物模型，为TCMI临床前安全性评价提供实验依据。
　　 本研究第一部分通过优化致敏方法，包括致敏途径、致敏次数、致敏剂量和抗体检测时间;选择合理的检测指标，如致敏血清中总IgE、总IgG、特异性IgE抗体水平，脾细胞细胞因子水平和过敏反应症状的观察等，建立用于大分子物质检测的BALB/c小鼠过敏反应模型;然后分别选用三种具有不同致敏能力的蛋白质卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)、牛血清白蛋白(AlbuminBovine，BSA)和马铃薯酸性磷酸酶（Phosphatase，acid,frompotato，PAP）对所建模型进行验证;最后将验证好的模型用于QKLI、GGSI及QKLI相关组分蛋白提取物的致敏性研究。优化后的致敏方法为:选用皮下致敏的途径，0.5mg/只的致敏剂量，第1，7天致敏，第14天取血或激发。选择的检测指标为:血清特异性IgE抗体水平、脾细胞细胞因子水平和过敏反应症状观察等。在此基础上，成功建立并验证了用于大分子物质检测的BALB/c小鼠过敏反应模型。模型应用发现水牛角蛋白提取物和栀子蛋白提取物的检测结果阳性，提示QKLI诱导过敏反应的发生可能是由于注射液中混入了水牛角蛋白或栀子蛋白;GGSI未检测到过敏反应的发生。
　　 本研究第二部分选用盐酸D-青霉胺(D-penicillaminehydrochloride，D-pen)、链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)为阳性对照药，苯巴比妥(Phenobarbital，PB)为阴性对照药，通过对阳性对照药量-效关系和PLN解剖动力学的研究，选择阳性对照药的最低有效剂量和最佳解剖时间;在此基础上，成功建立了BALB/c小鼠直接胭窝淋巴结试验(thedirectpopliteallymphnodeassay，d-PLNA)和间接PLNA(thesecondaryPLNA，s-PLNA)模型;最后应用建好的模型检测QKLI、GGSI及其组分提取物和主要单体成分的致敏性。结果发现QKLI中可能存在某些小分子致敏性成分，这些成分达到一定的浓度时能够诱导机体发生过敏反应;GGSI及其相关组分未检测到过敏反应的发生。
　　 综上所述，BALB/c小鼠能全面、准确地对大分子和小分子致敏原进行检测，并能对QKLI和GGSI的过敏反应有效预测，有望应用于其它TCMI的过敏反应研究。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

1．中药注射剂的过敏反应

2．现有过敏反应检测模型的不足

3．BALB／c小鼠过敏反应检测模型

4．利用BALB／c小鼠过敏反应检测模型研究清开灵注射液与葛根素注射液的致敏性

实验部分

第一部分 用于大分子物质检测的BALB／c小鼠过敏反应模型的建立与应用

实验一 用于大分子物质检测的BALB／c小鼠过敏反应模型的优化

实验二 用于大分子物质检测的BALB／c小鼠过敏反应模型的建立

实验三 用于大分子物质检测的BALB／c小鼠过敏反应模型的验证

实验四 用于大分子物质检测的BALB／c小鼠过敏反应模型的应用

第二部分 用于小分子物质检测的BALB／c小鼠过敏反应模型的建立与应用

实验一 腘窝淋巴结试验模型的构建

实验二 腘窝淋巴结试验研究清开灵和葛根素注射液的致敏性

讨论

结论

参考文献

致谢

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