糖尿病性骨质疏松发病规律及Runx2、Osterix在骨形成中的作用

摘要

目的：
　　 观察1型糖尿病大鼠骨代谢指标的变化特点，探讨糖尿病性骨质疏松症的发病规律，寻找预防糖尿病性骨质疏松的早期干预时机，同时观察1型糖尿病对成骨细胞特异性转录因子Runx2和Osterix基因和蛋白表达水平的影响，以期为临床上防治骨质疏松症提供理论依据。
　　 方法：
　　 1、模型制作和动物分组
　　 选用6-8周龄、平均体质量（200±20）g的雌性Wistar大鼠50只，适应性喂养1周后随机分为实验组(n=30)和对照组（C组，n=20）。实验组大鼠禁食12h后一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)60mg/kg制作1型糖尿病大鼠模型，观察大鼠是否出现多尿、多饮、多食、行动迟缓等，72h后测定大鼠随机血糖均≥16.7mmol/L为造模成功。从造模成功大鼠中随机选择20只进入实验，即为糖尿病模型组（D组）。
　　 2、指标测定
　　 根据实验需要每组分别于造模成功后第1w、3w、5w、8w各取5只大鼠，测定随机血糖后处死，取右侧股骨并剔除附着的软组织，采用RT-PCR和Westernblot检测右侧股骨Runx2和OsterixmRNA和蛋白表达水平。
　　 结果：
　　 实验组共有23只大鼠符合成模标准。实验期间，成模大鼠死亡2只。与C组相同时间点相比，D组大鼠血糖升高、体质量降低，差异均具有统计学意义(P＜0.01)，且D组大鼠体质量呈现先降低后升高然后再降低的趋势。RT-PCR结果显示，与C组相比，D组大鼠骨组织中Runx2和OsterixmRNA表达于造模后第1w开始明显下调(P＜0.01)，在之后的第3w、5w、8w时，Runx2和OsterixmRNA表达均下调(P＜0.01)。Westernblot结果显示，与C组相比，D组大鼠骨组织中Runx2和Osterix的蛋白表达水平于造模后第3w开始显著下降(P＜0.01)，在造模后第5w、8w时，D组大鼠骨组织中Runx2和Osterix的蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01)，并且随时间的延长其蛋白的表达量呈下降的趋势。
　　 结论：
　　 1、一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60mg/kg能显著诱导大鼠血糖升高、糖尿病症状明显，成功建立1型糖尿病大鼠模型。
　　 2、在糖尿病性骨质疏松大鼠的骨组织中，调控成骨分化的Runx2和Osterix的mRNA和蛋白表达水平均显著下降，骨形成降低。
　　 3、Runx2和Osterix的蛋白表达水平从第3w时开始明显降低，而Runx2和OsterixmRNA表达水平在第1w时就有显著降低，故第1w可能是预防骨质疏松的关键时间点。

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结果

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结论

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