2型糖尿病患者抵抗素基因多态性与非酒精性脂肪肝的关系

摘要

目的：通过检测T2DM患者抵抗素基因5’调控区的-420C/G多态性和内含子区的+299G/A多态性，探讨中国汉族人群中2型糖尿病患者抵抗素基因-420C/G多态性及+299G/A多态性与NAFLD的相关性。
　　 方法：
　　 按1999年世界卫生组织制定的糖尿病诊断标准，选取滨州医学院附属医院内分泌科T2DM患者738人，年龄26-72岁，所有2型糖尿病患者均排除1型糖尿病、继发性糖尿病、医源性糖尿病，并排除急性应激状态，如急性心肌梗死、脑梗塞、感染、外伤、手术、糖尿病酮症酸中毒、糖尿病非酮症高渗性昏迷等；甲状腺功能异常；1月内应用影响肾功能的药物，1月内用过降脂药物者。按肝脏超声分为2个亚组：(1)无脂肪肝组343例(男性162例，女性181例)，(2)NAFLD组395例(男性183例，女性212例)。NAFLD临床诊断标准按中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2010年修订的非酒精性脂肪肝病诊疗指南[25]，要求患者无饮酒史或折合乙醇摄入量男性<140g/周，女性<70g/周，并除外药物性肝病、病毒性肝炎、自身免疫性肝病、肝豆状核变性和全胃肠外营养等可致脂肪肝的特定疾病，肝脏彩超表现符合弥漫性脂肪肝的影像学诊断标准，且无其他原因可解释。正常对照组279例(男性126例，女性153例)，年龄22-73岁，均为同期滨州医学院附属医院体检中心的健康人群，并除外原发高血压或继发高血压；内分泌系统疾病，如糖耐量减低或糖尿病、库欣综合征、甲状腺功能亢进症或甲状腺功能减退症、肢端肥大症等；急性或慢性感染；肿瘤；病毒性肝炎等，且无饮酒史或折合乙醇摄入量男性<140g/周，女性<70g/周。所有研究对象均清晨空腹，测量身高、体重、腰围、臀围，计算体重指数、腰臀比。采用ELISA法测定血浆抵抗素，采用全自动生化仪测定空腹血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、γ-谷氨酰转肽酶、血甘油三酯、血总胆固醇、血高密度脂蛋白及低密度脂蛋白。采用液相平衡竞争放射免疫分析法测定空腹胰岛素。采用TIANGEN公司提供的基因组纯化试剂盒提取基因组DNA。采用聚合酶链反应-限制性片断多态性(PCR-RFLP)方法分析抵抗素420 C/G及+299G/A多态性基因型。采用SPSS13.0进行统计学分析。计量资料用mean±SD表示，非正态分布者取自然对数，多样本均数比较采用方差分析，计数资料采用x2检验，以比值比(OR)和95％CI表示相对风险度，相关性分析采用多因素非条件Logistic回归分析。
　　 结果：
　　 1.F2DM合并NAFLD组BMI及WHR的平均值较正常对照组及无脂肪肝组高(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组TG、TC、non-HDL及LDL较正常对照组及无脂肪肝组高(P<0.05)，HDL较正常对照组及无脂肪肝组低(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组FBG明显高于正常对照组(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组的FINS明显较正常对照组及无脂肪肝组高(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组的HOMA-IR明显较正常对照组及无脂肪肝组高(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组的ALT、AST及γ-GT较正常对照组及无脂肪肝组高(P<0.05)。
　　 2.T2DM合并NAFLD组抵抗素较正常对照组及无脂肪肝组高(P<0.05)。无脂肪肝组的抵抗素也高于正常对照组(P<0.05)。抵抗素基因-420位点SNP影响血浆抵抗素水平，抵抗素基因-420位点为GG基因型的人群血浆抵抗素水平较高(P<0.05)。
　　 3.正常对照组、T2DM合并NAFLD组及T2DM无脂肪肝组抵抗素基因-420位点均存在CC、CG和GG三种基因型，其中GG基因型频率较低。T2DM合并NAFLD组抵抗素-420 C/G基因型分布与正常对照组相比有统计学差异(P<0.01)，与无脂肪肝组相比也有统计学差异(P<0.05)，G等位基因频率高于正常对照组(P<0.01)及无脂肪肝组(P<0.05)。抵抗素-420位点GG基因型增加了T2DM的风险，是CC基因型的1.79倍(P<0.01)，是CG基因型的1.59倍(P<0.05)，是C等位基因携带者(CC+CG)的1.68倍(P<0.05)。GG基因型也增加了T2DM合并NAFLD的风险(P均<0.01)，是CC基因型的2.25倍，是CG基因型的1.88倍，是C等位基因携带者(CC+CG)的2.05倍。抵抗素-420位点为GG基因型的T2DM患者更易并发NAFLD(P<0.05)，其发生风险是C等位基因携带者(CC+CG)的1.60倍，是CC基因型的1.71倍。抵抗素-420位点GG基因型发生腹型肥胖的风险高(P<0.01)，是CC基因型的2.73倍。抵抗素-420位点为G等位基因的人群发生腹型肥胖的风险升高(P<0.01)，是C等位基因的1.65倍。抵抗素-420位点为GG基因型的T2DM合并NAFLD患者更易出现肝功损害(P<0.01)，其风险是CC基因型的3.97倍。T2DM合并NAFLD患者中G等位基因携带者发生肝功异常的风险升高(P<0.01)，是C等位基因携带者的2.02倍，抵抗素-420位点G等位基因突变增加了T2DM合并NAFLD患者肝功损害发生的风险。多因素非条件Logistc回归分析结果显示：抵抗素-420 C/G位点GG基因型与T2MD患者合并NAFLD患病相关，GG基因型的人群，T2DM合并NAFLD患病的风险增加(OR=2.95，95％CI1.15-5.06，P<0.05)。
　　 4.正常对照组、T2DM合并NAFLD组及T2DM无脂肪肝组抵抗素基因+299位点均存在GG、GA和从三种基因型，其中AA基因型频率较低。T2DM合并NAFLD组抵抗素+299 G/A基因型分布与正常对照组相比有统计学差异(P<0.05)，与无脂肪肝组相比也有统计学差异(P<0.05)，A等位基因频率高于正常对照组(P<0.01)及无脂肪肝组(P<0.05)。抵抗素基因+299位点从及AA+GA基因型与GG基因型相比T2DM合并NAFLD的风险均有统计学差异(P<0.05)，AA、AA+GA基因型的人群发生T2DM合并NAFLD的风险比GG基因型高，分别是GG基因型的1.80倍及1.45倍。在T2DM人群中，抵抗素+299 AA基因型者更易出现NAFLD，与GG及GA+GG基因型相比发生NAFLD的风险均有统计学差异(P<0.05)，是GG基因型的1.79倍，是GA+GG基因型的1.64倍。从基因型比GG基因型更易出现肥胖及腹型肥胖(P值均<0.01)，其发生肥胖的风险是GG基因型的2.05倍，发生腹型肥胖的风险是GG基因型的2.37倍。在肝功正常组与肝功异常组两组之间相比抵抗素+299 G/A位点基因型分布无统计学差异。多因素非条件Logistc回归分析结果显示：抵抗素+299 G/A位点基因型作为独立变量与T2MD患者合并NAFLD患病相关，其中AA基因型是T2DM合并NAFLD患病的危险因素，+299 G/A位点AA基因型使T2MD患者合并NAFLD患病的风险增加(OR=2.32，95％CI1.05-4.68，P<0.05)。
　　 结论：
　　 中国汉族人群中抵抗素基因-420位点存在CC、CG和GG三种基因型，+299位点存在GG、GA和AA三种基因型。抵抗素基因-420位点GG基因型升高了血浆抵抗素水平，增加了T2DM的发病风险，增加了腹型肥胖的风险，也增加T2DM并发NAFLD的风险，2型糖尿病人群中抵抗素-420位点为GG基因型的人更易患NAFLD，而如果T2DM并发NAFLD患者的抵抗素基因-420位点为GG基因型则更易出现肝功损害。抵抗素-420位点GG基因型与T2MD患者合并NAFLD患病相关。
　　 抵抗素基因+299位点AA基因型增加了肥胖和腹型肥胖的风险，也增加了T2DM并发NAFLD的风险。T2DM患者如抵抗素基因+299位点为AA基因型则发生NAFLD的风险升高。抵抗素+299位点从基因型与T2MD患者合并NAFLD患病相关。