气道平滑肌细胞内mRNA结合蛋白HuR对α-肌动蛋白表达的影响

摘要

目的:
　　人气道平滑肌细胞作为气道最主要的组成部分，其形态功能异常是哮喘的重要病理生理变化之一，血小板源性生长因子在损伤的气道上皮细胞中有较高的表达，可以刺激平滑肌细胞的增生以及细胞内多种蛋白的合成增加，从而引起平滑肌细胞形态、功能的改变，故血小板源性生长因子在哮喘的发生发展中发挥着重要的作用。α-肌动蛋白是人气道平滑肌细胞的特征性标志物，其含量可以反映人气道平滑肌细胞的数量及其收缩能力的改变。作为最具代表性的mRNA结合蛋白，HuR可与目的蛋白mRNA3'UTR的AREs结合，从细胞核穿梭入细胞质，使mRNA翻译增加，下游蛋白表达量增加;研究表明，α-肌动蛋白mRNA的3'端也存在AREs，所以我们猜测，HuR蛋白可能与α-SMA mRNA3'UTR的AREs结合，增强其稳定性，从而增加α-SMA蛋白量的表达。本研究采用体外培养人气道平滑肌细胞的方法，应用血小板源性刺激因子刺激模拟哮喘的病理状态，观察HuR蛋白对人气道平滑肌细胞中α-SMA表达的影响。
　　方法:
　　1.分组:①PDGF0 h组;②PDGF6 h组;③PDGF12h组;④PDGF24 h组;⑤siRNA+PDGF0 h组;⑥siRNA+PDGF12 h组;⑦consiRNA+PDGF0 h组;⑧consiRNA+PDGF12 h组;
　　2.应用Western blot，检测血小板源性刺激因子刺激后，人气道平滑肌细胞中人抗原R蛋白、α-SMA蛋白的水平。
　　3.应用RT-PCR方法，检测各组人气道平滑肌细胞中HuR及α-SMA的RNA水平。
　　4.使用siRNA沉默HuR蛋白，研究血小板源性刺激因子对人气道平滑肌细胞中α-SMA表达的影响。
　　结果:
　　血小板源性刺激因子呈时间依懒性增强细胞内HuR及α-SMA的表达，各组细胞HuR蛋白及mRNA相对表达量分别为:①PDGF刺激0h组:0.23±0.09、1.00±0.00;②PDGF刺激6h组:0.42±0.11、1.09±0.03;③PDGF刺激12 h组:0.93±0.21、1.16±0.03;④PDGF刺激24 h组:1.37±0.28、1.27±0.02;（均P＜0.05）;各组α-SMA蛋白以及mRNA相对表达量分别为:①PDGF刺激0h组:1.03±0.08、1.00±0.00;②PDGF刺激6h组:1.20±0.09、1.17±0.02;③PDGF刺激12 h组:1.39±0.11、1.23±0.02;④PDGF刺激24 h组:1.58±0.10、1.45±0.03;（均P＜0.05）。siRNA特异沉默HuR后，α-SMA表达量也相应减弱。HuR沉默后，平滑肌细胞中PDGF诱导的α-SMA的表达减少，HuR及α-SMA的蛋白相对表达量分别为:consiRNA+PDGF0 h组:1.20±0.11、0.34±0.07; consiRNA+PDGF12 h组:1.50±0.10、0.82±0.12; siHuR+PDGF0h组:1.23±0.13、0.37±0.09; siHuR+PDGF12h组:0.89±0.11、0.35±0.08。siHuR+PDGF0h组与consiRNA+PDGF0 h组HuR及α-SMA蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P＞0.05)，而特异的HuR干扰RNA转染细胞能显著降低HuR的表达，siHuR+PDGF12h组HuR蛋白相对表达量显著低于consiRNA+PDGF12h组(P＜0.05);同时PDGF诱导的α-SMA蛋白表达升高受到显著抑制，siHuR+PDGF12h组α-SMA蛋白相对表达量低于consiRNA+PDGF12h组(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.PDGF刺激可增加HBSMC中HuR及α-SMA的表达;
　　2.HuR参与PDGF诱导的α-SMA表达过程。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3．统计学处理

结果

附图

讨论

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文