可溶性鸟甘酸环化酶激活剂cinaciguat对糖尿病大鼠大血管的保护作用

摘要

据国际糖尿病联盟(international diabetes federation，IDF)最新统计显示，目前全世界糖尿病患者已达3.82亿（占全球总人口的8.3％），预计到2035年将可能接近6亿人次，其中超过3/4的患者将死于心血管并发症。
　　cinaciguat作为一种新型的可溶性鸟甘酸环化酶(soluble guanylate cyclases，sGC)激活剂，其在心血管疾病及其他疾病的治疗领域不断被探索和发现。目前，cinaciguat对急性心力衰竭、心肌缺血再灌注损伤、肺动脉高压、心肌肥厚，甚至骨质疏松、高眼压等疾病均具有明确的作用效果。cinaciguat现已成为医学界的研究热点，主要的研究方向为心血管方面，但是其具体作用机制及治疗范围尚未完全明确。糖尿病患者并发心血管疾病的比例较普通人群增加2～4倍，因此探索cinaciguat是否具有抗糖尿病大血管病变作用，对于降低糖尿病患者致死率、致残率具有极其重要的意义。
　　目的：
　　本实验以2型糖尿病大鼠为动物模型，分析sGC激活剂cinaciguat对糖尿病大鼠氧化应激、血脂代谢、血清内皮素含量、胸主动脉粘附分子表达以及大鼠胸主动脉形态学改变等的影响，评价其对糖尿病大鼠大血管的保护作用，并初步探讨其作用机制。
　　方法：
　　1.本研究采用高脂高糖饲料喂养及腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型。
　　2.实验分组:将SD大鼠分为正常对照(NC)组、单纯糖尿病模型(DM)组和糖尿病+cinaciguat低、中、高剂量[3.5、7、14 ug/(kg·d)](DM+LC、DM+MC和DM+HC)五组。
　　3.经下腔静脉采血，采用全自动生化分析仪检测大鼠血脂指标。
　　4.黄嘌呤氧化酶法检测血清总氧化物歧化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)活性、TBA法检测丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量，酶联免疫检测法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂检测血清内皮素(endothelin-1,ET-1)含量。
　　5.对大鼠胸主动脉进行苏木紫-伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色，观察各组大鼠胸主动脉形态学改变。
　　6.利用免疫组织化学方法检测血管的细胞间粘附分子-1(intercellularadhesion molecule1,ICAM-1,CD106)和血管细胞间粘附分子-1(vescular celladhesion molecule1,VCAM-1,CD54)蛋白的表达。
　　7.采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR，RT-PCR)检测ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表达情况。
　　结果：
　　1.与DM组大鼠相比较，DM+LC、DM+MC和DM+HC组大鼠血糖值变化不明显（均P＞0.05）;甘油三酯(triglycerides，TG)和总胆固醇(total cholesterol，TC)含量均有明显降低（均P＜0.05）。
　　2.与DM组大鼠相比较，DM+LC、DM+MC和DM+HC组大鼠T-SOD活性明显升高，MDA和ET-1含量显著降低（均P＜0.05）。
　　3.苏木紫-伊红(HE)染色显示糖尿病模型组大鼠胸主动脉内皮细胞脱落，平滑肌增殖和迁移，肌层明显增厚，中膜断裂;DM+LC、DM+MC和DM+HC组大鼠较之有所改善，结构改变介于糖尿病模型组和正常对照组之间。
　　4.与NC组大鼠相比较，DM组大鼠胸主动脉中ICAM-1和VCAM-1蛋白含量和mRNA的表达均有显著增高（P＜0.01或P＜0.05）;与DM组比较，DM+LC、DM+MC和DM+HC组胸主动脉ICAM-1和VCAM-1蛋白含量和mRNA的表达明显降低，均具有统计学差异（P＜0.01或P＜0.05）。
　　结论：
　　1.cinaciguat可能具有调节血脂，降低糖尿病大鼠氧化应激水平，改善血管内皮功能的作用。
　　2.通过大鼠胸主动脉病理切片可以观察到cinaciguat对糖尿病导致的血管内皮细胞损伤以及平滑肌增厚有一定的改善作用，从而延缓或抑制糖尿病血管早期病变的发生发展。
　　3.cinaciguat可下调ICAM-1和VCAM-1在胸主动脉的表达，从而延缓或者抑制糖尿病大鼠大血管病变的发展。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

实验材料和方法

1 实验材料

2 实验动物

3 观察指标与测定方法

4 统计学处理及分析

结果

1 大鼠的一般情况

2 cinaciguat对2型糖尿病模型大鼠相关指标的影响

讨论

1 cinaciguat的研究现状

2 cinaciguat大血管保护的作用机制探索

3 cinaciguat的药物安全性

4 总结

结论

参考文献

文献综述

附图

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文