柚皮素查尔酮通过诱导细胞自噬、凋亡及PI3K/Akt信号通路调控抗胶质瘤作用

摘要

目的:
　　研究的主要目的是探讨柚皮素查尔酮对U87MG胶质瘤细胞和异种移植小鼠模型的体外和体内抗胶质瘤作用。
　　方法:
　　首先进行柚皮素查尔酮对U87MG胶质瘤细胞的体外抗肿瘤作用试验。将U87MG胶质瘤细胞中加入不同浓度(0，2.5，5，10，50，75和100μM)柚皮素查尔酮，培养不同的时间(24，48，72h)，分别用MTT比色法检测细胞增殖。将U87MG胶质瘤细胞中加入不同浓度（0，10，50和100μM）柚皮素查尔酮培养48小时后，分别用吖啶橙/溴化乙锭和Hoechst33342染色后在荧光显微镜下评估细胞凋亡。将U87MG胶质瘤细胞中加入不同浓度(0，10，50和100μM)柚皮素查尔酮培养48小时后，在透射电子显微镜下观察细胞中自噬空泡的数量和大小。将U87MG胶质瘤细胞中加入不同浓度(0，10，75和100μM)柚皮素查尔酮培养48小时后，AnnexinⅤ-FITC和PI染色处理后，使用流式细胞仪检测柚皮素查尔酮对U87MG人胶质瘤细胞的早期凋亡和晚期凋亡作用。将U87MG胶质瘤细胞首先于无血清培养基中进行饥饿处理4小时，然后加入不同浓度(0，10，50和100μM)柚皮素查尔酮培养40分钟和48小时后用Western blot方法对柚皮素查尔酮对PI3K/Akt信号转导蛋白的作用进行评价。
　　使用异种移植小鼠模型进行柚皮素查尔酮对U87MG胶质瘤细胞的体内抗肿瘤作用试验。将U87MG细胞皮下注射于裸鼠右后肢处建立异种移植小鼠模型。将建模成功小鼠分为5组，分别给予不同剂量柚皮素查尔酮注射(5，20，40 and80mg/kg)。24天后，处死小鼠，测量肿瘤的重量、长度和宽度，计算肿瘤的体积。
　　结果:
　　柚皮素查尔酮对U87MG细胞的增殖有抑制作用，其细胞毒性作用随着浓度的增加而增强，同时随着作用时间的增加而增强。也就是说，柚皮素查尔酮对U87MG细胞的细胞毒性作用同时具有剂量依赖性和时间依赖性。加入柚皮素查尔酮的U87MG细胞经过吖啶橙/溴化乙锭染色后，通过荧光显微镜可观察到细胞收缩与细胞凋亡体的形成。经hoechst33342染色后，在荧光显微镜下可见染色质浓缩，DNA碎片，胞膜空泡。这些都是细胞凋亡的形态学表现特征。透射电子显微镜观察表明，柚皮素查尔酮能够诱导自噬空泡的形成，而且自噬空泡的数量和体积随柚皮素查尔酮剂量的增加而增加。流式细胞仪检测证明，柚皮素查尔酮能够诱导U87MG人胶质瘤细胞早期凋亡和晚期凋亡。柚皮素查尔酮同时能够抑制磷酸化和非磷酸化的PI3K和Akt蛋白，抑制NF-к B、Bcl-2，激活Caspase-3。体内实验结果显示，不同剂量柚皮素查尔酮干预组的肿瘤生长体积和重量均小于空白对照组。
　　结论:
　　柚皮素查尔酮在U87MG人胶质母细胞瘤细胞和异种移植瘤小鼠模型中通过诱导凋亡、自噬作用和PI3K/Akt信号通路调控抗胶质瘤作用。

目录

声明

摘要

符号说明

前言 查尔酮抗炎、抗癌作用研究新进展

材料与方法

结果

讨论

结论

附图及表格

参考文献

致谢

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