HippO-YAP/TAZ信号通路在生物力学刺激下牙周组织改建过程中的作用研究

摘要

Hippo-YAP/TAZ信号通路不仅仅在胚胎发育，内环境稳态和肿瘤发生等方面发挥着重要作用，也在机械-化学信号转导过程中发挥调控作用，正畸力牙齿移动过程是牙周膜受到生物力学刺激后产生的改建与再生的过程，这一机械-化学转换过程囊括了多种信号转导通路及多种生物细胞因子，另外有研究表明，转录共激活因子YAZ和TAZ可以与RUNX家族多种蛋白发生相互作用，RUNX2为TAZ下游直接靶基因，YAP可以不依赖核心Hippo级联激酶反应系统而发生表达量变化，但是其具体的调控机制目前欠缺具体研究。
　　为了探究Hippo信号通路在机械力刺激牙周膜改建过程中的调控作用，我们设计了如下实验:建立大鼠单侧上颌第一磨牙正畸力牙齿移动模型，控制机械力大小及施加时长，检测正畸力施加后12小时，24小时，2天，4天，7天及14天时大鼠上颌第一磨牙移动距离以及YAP，TAZ和RUNX2在的蛋白表达水平，采用HE染色进行牙周组织改建的组织学观察，WB用以检测此三种蛋白在不同时间点的表达量变化，免疫组织化学染色检测此三种蛋白的表达位置和强度变化，此外，使用免疫荧光双标技术分别检测YAP和RUNX2，TAZ和RUNX2的表达共定位情况。
　　结果显示:施加正畸力后12小时大鼠上颌第一磨牙开始快速移动，至7天达到最大距离，14天到达基本稳定状态;HE染色结果表明牙周组织改建于7天达到十分活跃状态，而在14天基本处于稳定且平衡的状态;Western blot结果显示YAP，TAZ及RUNX2蛋白从正畸力施加后2天开始表达升高，在加力后7天达到最高点，14天时表达量开始下降;免疫组织化学染色结果显示YAP和TAZ表达于骨细胞、骨基质、及牙周膜组织，自机械力施加开始表达量及表达强度开始上升，至7天达到最大值，14表达量开始下降;免疫荧光双标结果显示YAP，TAZ具有不同的表达模式，TAZ和RUNX2具有共表达现象，而YAP和RUNX2基本没有共表达。
　　通过此实验，我们验证了Hippo信号通路在OTM过程中发挥着机械信号转导中心的作用，并且，其核心效应因子YAP和TAZ的不同表达模式说明这两种蛋白发挥着不同的调控作用，分别是机械力-Hippo-TAZ-RUNX2通路和机械力-Hippo-YAP信号通路。TAZ和RUNX2的近乎相同的表达模式意味着他们在OTM过程中发挥着协同作用，然而其具体的分子调控机制还有待进一步研究。

目录

声明

摘要

缩略词表

试剂及器械

前言

材料与方法

1．1 动物准备

1．2 正畸力加力方法

1．3 取材

1．4 正畸力牙齿移动方法

1．5 石蜡包埋及切片

1．6 HE染色

1．7 免疫组织化学染色及免疫荧光染色

1．8 Western Blot分析

结果

1．1 正畸力牙齿移动距离在7天达到最大值

1．2 Western blot结果表明YAP，TAZ，和RUNX2在正畸力牙齿移动过程中呈现一致的变化趋势

1．3 HE染色呈现牙周组织改建过程

1．4 YAP，TAZ和RUNX2在正畸力牙齿移动过程中在骨细胞，成骨细胞和牙周膜细胞表达均升高

1．5 荧光双标结果表明：YAP／RUNX2和TAZ／RUNX2具有不同的表达模式

讨论

结论

参考文献

致谢

附录