低氧预适应小鼠海马中DNA甲基化转移酶、Reelin和蛋白磷酸酶-1的表达

摘要

目的：利用小鼠低氧预适应模型，观察小鼠海马中Reelin和pp1的表达以及3种DNA甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A和DNMT3B）的表达，从而了解DNA甲基化是否参与低氧预适应小鼠的脑保护作用。
　　方法：复制动物模型：选择6-8周龄，体重18-22克昆明雄性小鼠，随机分为3组。按以往的方法复制模型，即将小鼠置于含有新鲜空气、经过标定的125ml广口瓶内，以橡皮塞密闭，记时。动物一旦出现躁动，张口喘息，立即取出，转移到另一广口瓶内，密闭，记时，此次类推4次。实验分H0、H1、H4三组，H0为正常对照组，Hl为缺氧1次组，H4为重复缺氧4次组。各组取出后立即断头，迅速取出海马并置于低温冰箱中保存。用Real-timePCR法检测各组海马中三种甲基化转移酶（DNMT1、DNMT3A和DNMT3B）、Reelin和PP1在mRNA水平的表达。用Westernblot分析法检测各组海马中三种甲基化转移酶（DNMT1、DNMT3A和DNMT3B）、Reelin和PP1蛋白水平的表达。
　　结果：Real-timePCR和Westernblot结果分别以β-actin为内参得到各组相对值，经实验组和对照组比较得出：（1）与H0相比，H1和H4组中DNMT1mRNA和蛋白表达无明显变化，无统计学意义（P>0.05）；（2）与H0组相比，H1和H4组DNMT3AmRNA和蛋白表达明显减少，有统计学意义(P<0.05)；（3）与H0组相比，H4组DNMT3BmRNA和蛋白表达明显减少，有统计学意义(P<0.05)；（4）与H0组相比，H4组PP1mRNA和蛋白表达水平显著减少，有统计学意义(P<0.05)；（5）与H0组相比，H4组ReelinmRNA和蛋白水平的表达增加，有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：低氧预适应小鼠大脑海马组织中DNMT3A、DNMT3B的表达降低，PP1表达增加，Reelin表达降低。这些分子的表达改变可能在低氧预适应的脑保护作用中扮演重要角色。

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英文缩略表

1 前言

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要试剂Real-time PCR

2.1.3 主要仪器

2.2 方法

2.2.1 试剂配制

2.2.2 动物分组及小鼠缺氧模型的建立

2.2.3 TRlzol法提RNA

2.2.4 Real-time PCR

2.2.5 蛋白样品的提取

2.2.6 样品蛋白含量的测定

2.2.7 蛋白印迹（Western-blot）

2.2.8 数据处理及统计分析

3 结果

3.1 Real-time PCR结果

3.1.1 各组小鼠海马DNMT1 mRNA对beta-actin mRNA相对丰度值的比较

3.1.2 各组小鼠海马DNMT3A mRNA对beta-actin mRNA相对丰度值的比较

3.1.3 各组小鼠海马DNMT3B mRNA对beta-actin mRNA相对丰度值的比较

3.1.4 各组小鼠海马PP1 mRNA对beta-actin mRNA相对丰度值的比较

3.1.5 各组小鼠海马Reelin mRNA对beta-actin mRNA相对丰度值的比较

3.2 Western blot结果

3.2.1 各组小鼠海马DNMT1蛋白对beta-actin蛋白相对丰度值的比较

3.2.2 各组小鼠海马DNMT3A蛋白对beta-actin蛋白相对丰度值比较

3.2.3 各组小鼠海马DNMT3B蛋白对beta-actin蛋白相对丰度值比较

3.2.4 各组小鼠海马PP1蛋白对beta-actin蛋白相对丰度值比较

3.2.5 各组小鼠海马Reelin蛋白对beta-actin蛋白相对丰度值比较

4 讨论

5 结论

参考文献

综述

参考文献

致谢

作 者 简 介