新型荧光标记试剂的合成及其在高效液相色谱-质谱中的应用

摘要

高效液相色谱因其强大的分离分析能力已被广泛应用于许多研究和工业领域如生物化学、毒物学、化学化工、临床医学、神经生物学、食品卫生、环保检测和质量控制等。该法也是分析化学中发展最快、应用最广泛的领域之一。然而，由于样品中被测组分本身性质及其低含量的限制，并非所有化合物都可直接用于液相色谱分析。因此提高方法的检测灵敏度具有非常重要的意义。荧光检测具有很高的灵敏度，利用荧光标记技术使本身不发荧光或者荧光量子产率低的化合物(如脂肪胺、芳香胺，雌醇等)转化成发射荧光的衍生物，能够实现高灵敏荧光检测。本文重点研究了几种新型荧光标记试剂的合成和表征，考察了荧光标记试剂的光谱性质，优化了衍生反应条件、色谱分离条件，并将建立的方法应用于不同实际样品的分析。具体工作如下： 第一章：介绍了荧光原理及荧光标记法。简述了高效液相色谱的发展及其基础知识。综述了荧光标记试剂在胺类和羟基化合物的高效液相色谱分析中的应用。 第二章：四种荧光标记试剂：2-(11H-苯[a]咔唑)-乙酸(BCA)、 2-(11H-苯[a]咔唑)异丙基氯甲酸酯(BCPC-C1)、2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-C1)和2-(2-苯基-1-氢-菲[9，10-d]咪唑)-乙酸(PPIA)的设计合成、结构表征、光谱性质研究。 第三章：荧光标记试剂BCA用于脂肪胺的高效液相色谱．质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了脂肪胺的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于土壤和污水样品的测定，检验了所建立的分析方法的可行性。 第四章：荧光标记试剂BCPC-C1用于芳香胺的高效液相色谱一质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了芳香胺的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于污水样品的测定，检验了所建立的分析方法的可行性。 第五章：荧光标记试剂BCEC-C1用于雌二醇和雌三醇的高效液相色谱一质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了雌醇的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于藏羚羊粪样品的测定，检验了所建立的分析方法的可行性。 第六章：荧光标记试剂PPIA用于芳香胺的高效液相色谱．质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了芳香胺的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于污水样品的测定，检验了所建立的分析方法的可行性。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章荧光衍生化及其在高效液相色谱中的应用进展

1引言

2研究现状

2.1荧光衍生化的发展

2.2高效液相色谱

3论文工作

第二章荧光探针的设计与合成

1引言

2 2-(11H-苯[a]咔唑)-乙酸(BCA)的合成及表征

2.1合成路线设计

2.2试剂

2.3仪器

2.4 1，2-苯并-3,4-二氢咔唑的合成

2.5 11H-苯[a]咔唑的合成与表征

2.6 2-(11H-苯[a]咔唑)-乙酸(BCA)的合成与表征

3 2-(11H-苯[a]咔唑)异丙基氯甲酸酯(BCPC-Cl)的合成及表征

3.1合成路线设计

3.2试剂

3.3仪器

3.4 2-(11H-苯[a]咔唑)异丙醇的合成与表征

3.5 2-(11H-苯[a]咔唑)异丙基氯甲酸酯(BCPC-Cl)的合成与表征

4 2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)的合成及表征

4.1合成路线设计

4.2试剂

4.3仪器

4.4 2-(11H-苯[a]咔唑乙醇合成与结构表征

4.5 2-(11H-苯[a]咔唑)-乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)合成与表征

5 2-(2-苯基-1-氢-菲9，10-d]咪唑-乙酸(PPIA)的合成及表征

5.1合成路线设计

5.2试剂

5.3仪器

5.4 2-苯基咪唑[4，5-f]9，10-菲的合成

5.5 2-(2-苯基-1-氢-菲[9，10-d]咪唑-乙酸(PPIA)的合成与表征

6荧光光谱性质及紫外光谱性质对比

7小结

第三章2-(11H-苯[a]咔唑)-乙酸用于脂肪胺的高效液相色谱分离及质谱鉴定

1引言

2实验部分

2.1仪器与试剂

2.2标准溶液的配制

2.3脂肪胺的衍生化

2.4色谱及质谱条件

3结果与讨论

3.1 BCA与衍生物的光谱性质

3.2衍生条件的优化

3.3标准品的色谱分离及质谱鉴定

3.4线性回归方程及检测限

3.5重现性实验

4实际样品的色谱分离

4.1土壤和造纸厂污水中脂肪胺的提取

4.2土壤中和污水中脂肪胺的测定

4.3回收率试验

5结论

第四章2-(11H-苯[a]咔唑)异丙基氯甲酸酯用于芳香胺的高效液相色谱分离及质谱鉴定

1引言

2实验部分

2.1仪器与试剂

2.2标准溶液的配制

2.3芳香胺的衍生化

2.4色谱及质谱条件

3结果与讨论

3.1 BCPC-OH与衍生物的光谱性质

3.2衍生条件的优化

3.3标准品的色谱分离及质谱鉴定

3.4线性回归方程及检测限

3.5重现性实验

4实际样品的色谱分离

4.1污水中芳香胺的提取

4.2污水中芳香胺的测定

4.3回收率试验

5结论

第五章2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯用于雌醇的高效液相色谱分离及质谱鉴定

1引言

2实验部分

2.1仪器与试剂

2.2标准溶液的配制

2.3标准品的衍生过程

2.4色谱及质谱条件

3结果与讨论

3.1衍生条件的优化

3.2标准品的色谱分离及质谱鉴定

3.3线性回归方程及检测限

3.4重现性实验

4实际样品分析

4.1藏羚羊类粪便中雌醇的提取

4.2藏羚羊类粪便中雌醇的测定

4.3回收率试验

5结论

第六章2-(2-苯基-1-氢-菲[9，10-d]咪唑)-乙酸用于芳香胺的高效液相色谱分离及质谱鉴定

1引言

2实验部分

2.1仪器与试剂

2.2标准溶液的配制

2.3芳香胺的衍生化

2.4色谱及质谱条件

3结果与讨论

3.1衍生条件的优化

3.2标准品的色谱分离及质谱鉴定

3.3线性回归方程及检测限

3.4重现性实验

3.5PPIA与BCPC-Cl衍生芳香胺灵敏度的对比

4实际样品的色谱分离

4.1污水中芳香胺的提取

4.2污水中芳香胺的测定

4.3回收率试验

5结论

参考文献：

硕士期间完成的论文

致谢