信号放大方法在细胞中生物活性小分子检测中的应用研究

摘要

第一章，对相关肿瘤的内容进行了介绍，包括其形成的原因，对人的危害，以及对其并生的肿瘤标志物作了详细说明，并介绍了各种用于进行化学分析的方法，例如化学发光、荧光等方法，对其基本原理作了简要说明，并指出了这些方法常用于哪些检测方面，对当前我们的检测水平作了一定程度的概要以及对将来的发展前景作了简略展望。
　　第二章，本章设计了含有三磷酸腺苷(ATP)适体的DNA1分子，与ATP特异性结合后，构型发生变化，在连接酶E.coli的作用下，不需要连接DNA就能够成环，触发滚环复制放大(Rolling Cycle Amplification，RCA)。在三磷酸腺苷硫酸化酶的催化下，RCA的产物焦磷酸盐与5'磷酸化硫酸腺苷反应生成ATP。通过ATP的循环再生放大信号，硝酸溶解硫化镉纳米粒子，电化学检测ATP到1.0×10-10M。并且，本法对K562细胞及人血清中ATP的检测表现出来令人满意的回收率。
　　第三章，本章设计了一种含有荧光基团与猝灭剂的颈环分子信标(MB)，在DNA酶作用下，发生解环反应，在剪切酶的作用下，荧光基团与猝灭剂分离，释放出荧光信号。在优化条件下，可检测到1.0×10-8MATP以及8.0×10-9MGSH。并且在K562细胞中的回收率也令人满意。

目录

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摘要

第一章 绪论

1．1 癌症

1．1．1 肿瘤的定义

1．1．2 形成肿瘤的内在原因

1．1．3 形成肿瘤的外在原因

1．1．4 肿瘤标志物

1．1．5 三磷酸腺苷(ATP)

1．1．6 还原型的谷胱甘肽(GSH)

1．2 ECL(电致化学发光法)

1．2．1 ECL的原理

1．2．2 ECL(电致化学发光)的类型

1．2．3 ECL前景

1．3 荧光方法(FL)

1．3．1 FL的基本原理

1．3．2 荧光的分析的方法

1．3．3 荧光的分析方法的特点

1．3．4 有机物的荧光

1．4 化学发光方法

1．4．1 化学发光的原理

1．4．2 比较常见的化学发光

1．5 化学发光的应用

1．5．1 ECL检测肿瘤标志物

1．5．2 GSH的荧光法检测

1．5．3 ECL测ATP

1．5．4 鲁米诺-H2O2在滚环扩增技术下来检测DNA

第二章 基于ATP再生放大超灵敏检测ATP及其应用在细胞匀浆和人类的血清

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 仪器与试剂

2．2．2 实验方法

2．3 结果与讨论

2．3．1 实验原理

2．3．2 石英晶体微天平对滚环扩增产物的表征

2．3．3 CdS纳米粒子与bbc-CdS纳米粒子的表征

2．3．4 灵敏度

2．3．5 选择性

2．3．6 在复杂的生物样品之中的ATP检测

2．4 小结

第三章 DNA酶的多次代谢实现细胞匀浆中的ATP与还原型巯基的放大检测

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器和试剂

3．2．2 实验方法

3．3 结果与讨论

3．3．1 ATP与GSH检测试验的原理

3．3．2 ATP与GSH检测的灵敏度

3．3．3 ATP与还原型巯基分析的选择性

3．3．4 细胞匀浆中ATP的检测

3．4 小结

结论与展望

参考文献

致谢

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