基于酶促反应的流动注射电化学发光分析法的研究

摘要

本文简要回顾了电化学发光(ECL)分析法的发展历史及其应用，介绍了它的主要反应体系及其反应机理，ECL与其他分析方法的联用技术，详细描述了发光试剂鲁米诺的发光原理及应用，以及固定酶的一些方法。在制备微柱状酶反应器的基础上，结合流动注射和电化学发光分析法，成功建立了测定鸟嘌呤、硫鸟嘌呤、阿昔洛韦、胆固醇的流动注射-电化学发光分析法。本论文的主要研究内容有以下几个部分。
　　1.基于鸟嘌呤、硫鸟嘌呤与酶柱中的黄嘌呤氧化酶反应生成过氧化氢，继而与鲁米诺发生电化学发光反应的原理，建立了流动注射电化学发光测定鸟嘌呤、硫鸟嘌呤的新方法，并将其应用于实际药品的检测。在pH=9.0的0.05mol/L的硼砂介质、激发电位为0.65V、鲁米诺浓度为5.00×10-4mol/L、流速为1.20mL/min的优化条件下，测定鸟嘌呤的线性范围为4.53×10-2μg/mL～10.6μg/mL，线性相关系数为0.9994，检出限为2.0×10-3μg/mL，相对标准偏差小于1.40％(n=9);测定硫鸟嘌呤的浓度线性范围为0.50μg/mL～32.3μg/mL，回归方程为:IECL=40.75C(μg/mL)+194.6，相关系数为0.9995，检出限为0.12μg/m。对于实际药品硫鸟嘌呤片的测定，相对标准偏差小于1.60％（n=9），加标回收率为97.8％～107％。
　　2.基于阿昔洛韦与酶柱中的黄嘌呤氧化酶反应生成过氧化氢，继而与鲁米诺发生电化学发光反应的原理，建立了流动注射电化学发光测定阿昔洛韦的新方法，并将其应用于实际药品的检测。在pH=9.0的0.05mol/L的硼砂介质、激发电位为0.65V、鲁米诺浓度为5.00×10-4mol/L、流速为1.90mL/min的优化条件下，测定阿昔洛韦的浓度线性范围为0.56～22.5μg/mL，线性相关系数为0.9995，检出限为0.32μg/mL，测定实际药品的相对标准偏差小于1.80％（n=9），加标回收率为95.5％～108％。
　　3.基于胆固醇与酶柱中的胆固醇氧化酶反应生成过氧化氢，继而与鲁米诺发生电化学发光反应的原理，建立了流动注射电化学发光测定胆固醇的新方法，并将其应用于实际药品的检测。在pH=8.0的硼砂缓冲溶液中、激发电位为0.65V、鲁米诺浓度为5.00×10-4mol/L、流速为1.90mL/min的优化条件下，测定阿昔洛韦的线性范围为8.00×10-2μg/mL～19.3μg/mL，线性相关系数为0.9991，检出限为3.80×10-3μg/mL，测定实际药品的相对标准偏差小于1.42％（n=9），加标回收率为99.1％～107.1％。

目录

摘要

第一章 文献综述

1．1 电化学发光分析及其发展应用

1．2 电化学发光的一般反应机理

1．2．1 湮灭电化学发光(Annihilation ECL)反应机理

1．2．2 共反应物电化学发光(Coreactant ECL)反应机理

1．2．3 阴极电化学发光(Cathodic Luminescence)

1．3 电化学发光体系及其在分析化学中的应用

1．3．1 无机化合物的电化学发光体系

1．3．2 有机化合物的电化学发光体系

1．4 电化学发光与其他技术的联用

1．4．1 流动注射-电化学发光技术

1．4．2 高效液相色谱-电化学发光技术

1．4．3 毛细管电泳-电化学发光技术

1．5 鲁米诺与ECL

1．5．1 鲁米诺简介

1．5．2 鲁米诺ECL的原理

1．5．3 鲁米诺ECL的应用

1．6 酶与ECL

1．6．1 固定化酶

1．6．2 固定化酶反应器

1．6．3 酶反应ECL

1．7 本论文的目的及意义

参考文献

第二章 实验部分

2．1 实验仪器与试剂

2．2 储备液的配置

2．3 实验方法

2．3．1 电极的预处理

2．3．2 酶反应器的制备

2．3．3 实验测定方法

参考文献

第三章 流动注射电化学发光法测定鸟嘌呤、硫鸟嘌呤

3．1 引言

3．2 实验结果与讨论

3．2．1 酶反应器的催化效果及稳定性

3．2．2 实验条件的优化

3．2．3 线性范围、检出限和精密度

3．2．4 干扰试验

3．2．5 样品测定

3．3 小结

参考文献

第四章 流动注射电化学发光法测定阿昔洛韦

4．1 引言

4．2 实验结果与讨论

4．2．1 酶反应器的催化效果

4．2．2 实验条件的优化

4．2．3 线性范围、检出限和精密度

4．2．4 干扰试验

4．2．5 样品测定

4．3 本章小结

参考文献

第五章 流动注射电化学发光法测定牛奶中的胆固醇

5．1 引言

5．2 实验部分

5．2．1 仪器与试剂

5．2．2 酶反应器的制备

5．2．3 测定方法

5．3 结果与讨论

5．3．1 酶反应器的催化效果

5．3．2 实验条件的优化

5．3．3 线性范围、检出限和精密度

5．3．4 干扰试验

5．3．5 样品测定

5．4 本章小结

参考文献

结论

致谢

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