胶质细胞源性神经营养因子与PC12工程细胞在大鼠脊髓损伤治疗中的协同作用

摘要

目的研究胶质细胞源性神经营样因子(GNDF)和PC12-GFR(1-RET基因工程细胞对脊髓半损伤大鼠神经元存活和纤维再生的协同作用.探讨GDNF的神经营养作用途径及其作用机制.方法应用细胞转染、G418筛选和挑选单克隆的细胞培养技术,构建高表达GDNF受体GFR(1和RET蛋白的基因工程细胞株PC12-GFR(1-RET.在建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型的基础上,将体外培养的PC12-GFR(1-RET工程细胞移植入脊髓损伤腔,同时局部应用GDNF.采用斜板实验和BBB联合功能评分观察大鼠功能恢复情况,并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价PC12-GFR(1-RET工程细胞和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响.结果单独应用GDNF,皮质神经元比对照组明显增大,红核中两者虽无统计学差异,但GDNF组大神经元数目(600(m<'2>以上)多于对照组;PC12-GFR(1-RET工程细胞组皮质和红核神经元均比GDNF组明显增大.说明局部应用外源性GDNF和PC12-GFR(1-RET工程细胞都能减轻脊髓半横断损伤后引起的逆性皮质和红核神经元损害.单独应用PC12-GFR(1-RET工程细胞可促进脊髓下行长传导束再生和肢体运动功能恢复;而单独应用GDNF可促进损伤后早期后肢运动功能的恢复,而对损伤后8周轴突再生和后肢运动功能无明显影响.观测、统计上述各脊髓损伤指标发现:PC12-GFR(1-RET工程细胞和GD-NF联合应用对脊髓损伤的修复作用强于GDNF或PC12-GFR(1-RET工程细胞单独应用.结论GDNF和PC12-GFR(1-RET工程细胞在对脊髓损伤修复治疗中具有协同作用.

目录

文摘

英文文摘

1前言

2材料与方法

2.1试剂与材料

2.2实验方法

3结果

3.1 GDNF对PC12工程细胞的影响

3.2 PC12-GFR1-RET工程细胞与GDNF联合治疗脊髓损伤

4讨论

4.1构建PC12-GFRa1-RET工程细胞

4.2建立脊髓半横断损伤模型

4.3 DNF促进脊髓损伤修复

4.4 PC12-GFRa1-RET与GDNF在联合治疗脊髓损伤修复中的协同作用

4.5 GDNF促进PC12-GFRa1-RET存活的机制研究

4.6基因治疗中移植细胞的选择

4.7 GFRa1和RET基因修饰的PC12-GFRa1-RET治疗大鼠脊髓半横断损伤

5结论

参考文献

致谢

综述GDNF家族神经营养因子及脊髓损伤基因治疗的研究进展