小干扰RNA靶向VEGF基因在体内外抑制乳腺癌细胞增殖的研究

摘要

背景与目的：血管生成与肿瘤生长、侵袭、转移密切相关。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)能特异地促进内皮细胞分裂、增殖及迁移，在肿瘤新生血管生成过程中起着至关重要的作用。通过RNA干扰技术(RANinterference，RNAi)抑制VEGF表达的抗血管生成疗法可有效应用于肿瘤治疗。本课题采用化学修饰的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)在体内外抑制VEGF基因表达，探讨化学修饰的siRNA介导的RNAi在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。 方法 选用阳离子脂质体Lipofectamine2000<'TM>作为转染试剂，将针对人VEGF基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MCF-7和裸鼠移植瘤，在体内外诱导RNAi。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况，逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)及蛋白印迹试验(Western Blotting)检测siRNA治疗组和对照组VEGF,Bcl-2和Bax基因表达的变化。 结果 体外实验结果显示：靶向VEGF基因siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后，细胞生长抑制率达52.5％；Hoechst33258荧光染色显示细胞内可见凋亡小体；VEGF及Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(p<0.01)，Bax基因的表达未发生明显变化，Bcl-2和Bax比值下降。裸鼠体内实验结果显示：siRNA治疗组瘤组织的增长受到明显抑制；RT-PCR及蛋白印迹试验证实VEGF,Bcl-2和Bax变化与体外结果一致。体内外对照组各指标均无显著变化。 结论 化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功下调靶基因VEGF的表达，抑制MCF-7细胞增殖，并对MCF-7细胞有明显的凋亡诱导作用是潜在的肿瘤治疗新方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

引 言

第一章实验材料

第二章实验方法

第三章实验结果

第四章讨 论

结 论

参考文献

RNA干扰及其在肿瘤研究中的应用

攻读学位期间的研究成果

致 谢