人CD59活性位点短肽封条的抗肿瘤效应的研究

摘要

目的 本研究旨在通过噬菌体展示技术寻找与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点，研制特异性针对CD59活性位点的短肽封条，观测其封闭或干扰效应，为肿瘤的靶向免疫治疗开辟一条新途径。 方法 采用噬菌体随机十二肽库展示技术对Hela细胞裂解蛋白及层析纯化后的CHO细胞的裂解蛋白进行5轮亲和淘洗筛选；从筛选后的噬菌体库中分别随机挑选15/16个噬菌体克隆进行测序，并对随机挑选的噬菌体克隆与野生型M13噬菌体进行竞争结合实验；经序列分析找出共享序列并推断其相应的氨基酸位点，同时与CD59活性区域进行分析比对，找出人CD59分子的活性位点，并合成短肽封条，观测其封闭效应。 结果 经过5轮全细胞筛选后，两种噬菌体库的回收量均可达到10<'7>～10<'8>数量级，且竞争结合分析及细胞特异性结合分析显示筛选后的噬菌体克隆及噬菌体库对两种细胞蛋白均具有明显的特异性结合效应。通过测序结果推断出Hela细胞表面CD59的多肽序列(-ACHWPWCHGC-)与CHO细胞表面CD59的多肽序列(-ACHWWHAWTC-，-ACWWFHPHLC-)，并利用高同源性的Hela细胞的CD59短肽序列为模型合成高特异性的短肽封条。 结论 利用噬菌体肽库对两种细胞进行全细胞蛋白筛选得到了与CD59特异性结合的短肽序列，该短肽序列可能是位于肿瘤细胞表面CD59的配体蛋白。经活性检测证实该短肽封条对人CD59有明显的封闭作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

材料和方法

一材料

二、方法

结果

一、5轮噬菌体肽库筛选后的计数结果及分析

二、噬菌体克隆与人CD59的结合实验结果

三、野生型噬菌体VcsM13的竞争结合实验结果

四、单克隆噬菌体ssDNA提取的检测

五、测序结果及分析

六、短肽的疏水性分析

七、同源性分析

八、对短肽封条进行功能性检测结果

九、免疫组织化学染色实验结果

讨论

结论

参考文献

附录

综述：噬箘体随机肽库展示技术及CD59分子与肿瘤关系的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果