靶向Notch-1基因的siRNA对人脑胶质母细胞瘤干细胞裸鼠体内成瘤性的影响

摘要

目的：观察靶向Notch-1基因的小干扰RNA(siRNA)对人脑胶质母细胞瘤干细胞裸鼠体内成瘤性的影响。
　　 方法：采用无血清培养法(DMEM/F12培养基，含2％B27、LIF、EGF、b-FGF各20ng/mL)从人脑胶质瘤母细胞瘤(GBM)细胞系TJ905中提取GBM肿瘤干细胞，并使用免疫荧光的方法对其CD133和Nestin抗原的表达进行检测鉴定。使用OligofectamineTM将靶向Notch-1基因的siRNA转染人脑胶质母细胞瘤干细胞中，并设立无意序列siRNA(nonsensesiRNA)转染组。然后，把经Notch-1siRNA和经无意序列siRNA转染的细胞及未经转染的细胞分为三组，每组细胞悬液注射裸鼠5只，观察动物的成瘤情况，并记录裸鼠移植瘤的体积v=1/2ab2(a为肿瘤的长径，b为肿瘤的宽径)，观察20天后处死动物，取出肿瘤组织，常规石蜡包埋，组织切片HE染色并进行Notch-1的免疫组化染色测定。
　　 结果：1．通过无血清培养的GBM细胞系细胞中只有少数会形成肿瘤细胞球。2．这种细胞球经免疫荧光检测其CD133和Nestin抗原高表达，证实其为胶质瘤肿瘤干细胞。3．经靶向Notch-1基因的siRNA转染后可以有效抑制GBM干细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，Notch-1siRNA转染组与NonsensesiRNA转染组，以及Notch-1siRNA转染组与对照组之间比较均有统计学意义(p＜0.05)。4．免疫组化结果显示：Notch-1的表达在Notch-1siRNA转染组与其它两组之间的比较也同样具有统计学意义(p＜0.01)。
　　 结论：人脑胶质母细胞瘤(GBM)细胞中可以通过无血清培养分离出悬浮生长的肿瘤干细胞球，这种GBM肿瘤干细胞的动物体内成瘤性高于GBM细胞；靶向Notch-1基因的小干扰RNA可以通过有效地降低肿瘤干细胞Notch-1的表达来抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，但还需要对siRNA的合理的使用剂量与转染方式进行更加深入的研究。