MicroRNA-16调控细胞周期对卵巢癌顺铂耐药的影响

摘要

目的:探讨MicroRNA-16通过调节靶基因CCND1及蛋白表达产物CyclinD1(细胞周期相关蛋白D1)，参与上皮性卵巢癌耐药细胞周期调控进程，并研究其与顺铂耐药的关系。
　　 方法:MicroRNA-16成体模拟物(mimics)及其阴性对照片段(negative control NC)以脂质体Lipofectamine2000为载体成功转染于人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP细胞;实时荧光定量PCR检测各实验组细胞中miR-16的相对表达量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测耐药细胞株耐药系数及转染前后细胞顺铂的半数抑制浓度;流式细胞仪检测转染前后各组细胞细胞周期变化;Western-blot蛋白印迹法检测细胞周期相关蛋白CyclinD1蛋白表达量的变化。应用SPSS17.0进行统计学分析，采用One-wayANOVA单因素方差分析，两组组间比较均采用t检验，P＜0.05为差别有显著性。
　　 结果:SKOV3/DDP细胞株的耐药系数=4.90; SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平较SKOV3细胞明显降低，差异有显著性意义(P=0.000)，转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平较转染前明显升高(P=0.001); SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mimics后，顺铂半数抑制浓度(10.69±1.08)与转染NC细胞(18.23±2.10)相比明显降低(P=0.001); SKOV3/DDP细胞成功转染miR-16后，G1期细胞所占比例上升，差异有显著性意义(P＜0.01);在蛋白水平，耐药株SKOV3/DDP较SKOV3细胞周期相关蛋白CyclinD1蛋白相对表达量明显升高，转染miR-16 mimics后CyclinD1相对表达量明显下降，差异有显著性意义(P＜0.01)。
　　 结论:microRNA-16可能通过调控靶向负性调控CCND1基因及其蛋白表达产物CyclinD1，参与上皮性卵巢癌细胞周期的进程，并逆转卵巢癌耐药细胞株的耐药性。

目录

摘要

引言

第一章 材料及方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 统计学方法

第二章 结果

2．1 SKOV3／DDP耐药系数

2．2 各组细胞中miR-16的表达

2．3 流式细胞仪检测转染前后SKOV3／DDP细胞系细胞周期的变化

2．4 各实验组CyclinD1蛋白相对表达量的检测

2．5 SKOV3／DPP细胞转染后顺铂半数抑制浓度的变化

附图

第三章 讨论

3．1 microRNAs的生物学特性及功能

3．2 microRNAs与肿瘤

3．3 CCND1基因与卵巢癌顺铂耐药的关系

3．4 microRNA-16与卵巢癌顺铂耐药的关系

3．5 miRNA-16与卵巢癌顺铂耐药性的研究及展望

结论

参考文献

综述

攻读学位期间的研究成果

致谢

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