海参肠肽对糖基化终末产物诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用及其机制的研究

摘要

目的：探讨海参肠肽提取物对糖基化终末产物（AGEs）所致的人脐静脉内皮细胞氧化应激、炎症反应及凋亡等损伤是否具有保护作用及其机制。
　　方法：人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分别给予10μ M（终浓度下同）氨基胍/维生素E及不同浓度海参肠肽（10,20,40ug/ml）干预，半小时后暴露于终浓度为200μ g/ml AGEs中培养48小时，分别对细胞进行AO/EB染色并在共聚焦显微镜下观察；MDA、SOD、ROS试剂盒检测；RIPA强裂解液裂解细胞提取细胞蛋白，通过蛋白凝胶成像检测RAGE,、NF-kB及TGF-β1等蛋白的表达情况。
　　结果：（1）不同浓度海参肠肽提取物可抑制AGEs所致的脐静脉内皮损伤，差异具有统计学意义，经10、20、40ug/ml海参肠肽干预的细胞凋亡率分别为24.95±0.66％，17.13±0.62%,12.20±0.71%（均P＜0.01）；（2）与对照组相比，不同浓度海参肠肽可显著降低ROS、MDA含量，提高SOD活性（均P＜0.01），10、20、40ug/ml海参肠肽干预的细胞ROS活性分别为117.18±1.52%,109.25±4.89%，105.60±3.97%，MDA含量分别为2.56±0.08nmol/ml,1.89±1.45nmol/ml及1.71±0.84nmol/ml，SOD活性分别为80.45±18.56U/ml,96.82±9.32U/ml,102.23±9.32U/ml；（3）不同浓度海参肠肽提取物干预人脐静脉内皮细胞后，RAGE、NF-kB及TGF-β1等蛋白表达量与对照组比较均显著降低，差异具有统计学意义（均P＜0.01），10、20、40ug/ml海参肠肽干预细胞后RAGE相对表达量分别为1.15±0.03,0.89±0.04,0.78±0.03(对照组浓度为1，下同）,NF-kB相对表达量分别为0.55±0.04,0.45±0.02,0.37±0.02，TGF-β1相对表达量分别为0.75±0.03,0.72±0.08,0.66±0.03。
　　结论：海参肠肽提取蛋白对AGEs诱导的人脐静脉内皮损伤具有保护作用,且具有浓度依赖性；其保护作用可能是通过RAGE/NF-κ B通路进行的；海参肠肽有望成为糖尿病血管并发症治疗的新手段。

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引言

第一章 材料与方法

1.1实验试剂

1.2实验仪器

1.3主要溶液

1.4 实验步骤

第二章 结 果

2.1 海参肠肽对AGEs诱导的HUVECs细胞凋亡的作用

2.2 海参肠肽对AGEs诱导的HUVECs细胞氧化应激的作用

2.3 海参肠肽对AGEs诱导损伤细胞中RAGE蛋白含量的影响

2.4 海参肠肽对AGEs诱导损伤细胞中NF-κB蛋白含量的影响

2.5 海参肠肽对AGEs诱导损伤细胞中TGF-β1蛋白含量的影响

第三章 讨 论

结论

参考文献

综述: 糖尿病血管病变的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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