2,3-吲哚醌抗人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞侵袭及迁移机制研究

摘要

背景：2，3-吲哚醌(Isatin)是色氨酸代谢途径的产物，广泛存在于人和哺乳动物的组织和体液中。已经发现Isatin对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长有显著的抑制作用。
　　目的：研究Isatin对SH-SY5Y细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制。
　　方法：不同浓度Isatin（100，200，400μmol/L）处理细胞，transwell小室测定SH-SY5Y细胞侵袭能力，划痕法测定SH-SY5Y细胞迁移能力，Real-time PCR检测SH-SY5Y细胞MMP2和MMP9的表达水平；Western blot检测SH-SY5Y细胞MMP2和MMP9的表达和STAT3的磷酸化水平。
　　结果：Isatin能显著抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞侵袭和迁移能力。Isatin处理细胞后，SH-SY5Y细胞穿过 Transwell小室的数量明显减少，侵袭抑制率分别为42.14％和87.42%(P<0.01)，200μmol/L Isatin在36h和48h对SH-SY5Y细胞迁移抑制率为42.78%和45.03%(P<0.05)。Real-time PCR显示，随着Isatin浓度增加，MMP2和MMP9 mRNA表达显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示，随着Isatin浓度增加，MMP2和MMP9 mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05)；Western blot结果表明，随着Isatin浓度增加，STAT3磷酸化水平显著下降(P<0.01)，且呈浓度依赖关系。
　　结论：Isatin明显抑制SH-SY5Y细胞侵袭和迁移，该作用可能和MMP2，MMP9表达量降低以及下调磷酸化STAT3有关。

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引言

第1章 实验材料

1.1细胞株

1.2 主要试剂耗材

1.3 主要仪器

第2章 实验方法

2.1 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系的体外培养

2.2 Transwell测定细胞侵袭能力

2.3 划痕实验测定测定细胞迁移能力

2.4实时定量(Real-time)PCR检测MMP2、MMP9 mRNA相对表达量

2.5 Western Blotting检测MMP2，MMP9，pSTAT3的相对表达量

2.6 统计学方法

第3章 实验结果

3.1 Isatin对SH-SY5Y细胞侵袭的影响

3.2 Isatin 对SH-SY5Y细胞迁移的影响

3.3 Isatin对MMP2、MMP9 mRNA相对表达量的影响

3.4 Isatin对MMP2、MMP9蛋白相对表达量的影响

3.5 Isatin对STAT3Tyr705位点磷酸化的影响

第4章 讨论

结论

参考文献

综述:神经母细胞瘤转移分子机制的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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