MAPK信号通路介导的氧化损伤对晶状体上皮细胞水通道蛋白表达的影响

摘要

目的：观察水通道蛋白1(aquaprin1，AQP1)和水通道蛋白5(aquaprin5，AQP5)在晶状体囊膜及培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells，HLECs）的表达，研究H2O2引起的氧化损伤对体外培养HLECs中AQP1和AQP5的表达变化，并探讨丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路在其中的作用。
　　方法：（1）收集患有年龄相关性白内障并于我院眼科行白内障手术患者晶体前囊膜，及我院低温冷冻科保存的角膜移植术后供眼剩余晶状体前囊膜。应用荧光定量PCR技术（RT-PCR）检测两种组织晶状体上皮细胞中AQP1和AQP5mRNA的表达，免疫组织化学染色法检测AQP1和AQP5蛋白水平的表达（2）用H2O2刺激体外培养的HLECs，实验分为空白对照组，H2O2刺激组，MAPK通路抑制剂预处理并行H2O2刺激组。免疫印迹法（Western Blot，WB）检测各组总的ERK、p38、JNK和p-ERK、p-p38、p-JNK的表达情况，及AQP1和AQP5的表达情况，RT-PCR）方法检测AQP1和AQP5mRNA的表达。
　　结果：（1）AQP5和AQP1在人囊膜及体外培养的HLECs表达，白内障患者晶状体上皮细胞AQP1和AQP5表达明显低于透明晶体。（2）H2O2刺激可使培养的人晶状体上皮细胞AQP1和AQP5mRNA和蛋白表达降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。（3） H2O2刺激可使p-ERK、p-p38表达升高，差异有统计学意义（P＜0.05），p-JNK未见明显升高，差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）ERK及p38抑制剂预处理组AQP1mRNA及蛋白表达高于单纯H2O2刺激组，差异有统计学意义（P＜0.05），AQP5mRNA及蛋白表达同单纯H2O2刺激组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：（1）人晶状体上皮细胞表达AQP1和AQP5，其表达降低可能导致年龄相关性白内障的发生。（2）ERK和p38通路介导H2O2刺激引起的晶状体上皮细胞AQP1的表达降低。（3）MAPK通路可能不介导H2O2刺激引起的晶状体上皮细胞AQP5的表达降低。

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引言

第一章 材料和方法

1.1实验材料

1.1.1实验对象

1.1.2实验主要仪器与设备

1.1.3实验主要耗材和试剂

1.1.4主要溶液配制

1.2实验方法

1.2.1 细胞培养

1.2.2 Real-time RT-PCR实验方法

1.2.3 Western blot 实验方法

1.2.4免疫组织化学实验方法

1.3. 统计学方法

第二章 结 果

2.1 体外培养人晶状体上皮细胞的形态学观察

2.2 人晶状体囊膜AQP1和AQP5的表达

2.3 H2O2介导的体外培养HLECs 细胞AQP1和AQP5的表达

2.4 H2O2刺激晶状体上皮细胞后JNK通路的改变

2.5 H2O2刺激晶状体上皮细胞后ERK通路的改变

2.6 H2O2刺激晶状体上皮细胞后p38通路的改变

2.7 抑制剂预处理后晶状体上皮AQP1的表达变化

2.8抑制剂预处理后晶状体上皮AQP5的表达变化

第三章 讨 论

结论

参考文献

综述: 水通道蛋白在晶状体的表达及其与白内障关系的研究进展

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢

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