壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体的生物相容性及促犬牙槽骨再生的研究

摘要

目的：本项目拟制备壳聚糖-甘油磷酸温敏水凝胶（CS/α,β-GP）及负载含有骨形态蛋白2质粒DNA（pDNA-BMP2）的壳聚糖纳米粒CSn(pDNA-BMP2)，二者复合，构建CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP复合修复体系。研究该体系的组织相容性，以及该体系在比格犬牙槽骨再生中的作用。
　　方法：
　　一、包载pDNA-BMP2的复合修复体系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP及不包载pDNA-BMP2的纳米温敏水凝胶复合支架（CS/CSn-GP）的制备及性质检测：采用离子交联法制备CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP及CS/CSn-GP复合修复体系；采用扫描电镜观察其形态；试管倒置法测定其温敏性。
　　二、CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性的测定：将1ml CS/CSn-GP复合修复体系注入18只SD大鼠左、右后肢大腿肌袋内，于3天及1、2、4、6、9周分批处死，取注射部位组织，进行HE染色，并观察其炎症反应。
　　三、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在非炎症性骨缺损中的修复作用测定：SD大鼠颅骨左右两侧，各做5mm圆形缺损，随机分为两组：
　　CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组（包载质粒组）和CS/CSn-GP组（无质粒组）。两组大鼠均于颅骨左侧分别注入CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP或CS/CSn-GP复合体系，右侧不置入任何材料做空白对照。于第4周和第8周，两组分批处死等量SD大鼠，实验部位颅骨HE染色，观察其成骨差异性。
　　四、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在炎症性骨缺损中的修复作用测定：比格犬第2、3前磨牙，建立牙周炎模型，将32颗实验牙齿随机分为三组：①CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组（包载质粒组）；②CS/CSn-GP组（无质粒组）；③空白组。每组注入相应材料，8周后处死。
　　（1）Masson三染色观察牙周炎部位牙槽骨再生的情况；
　　（2）钙钴法染色观察骨缺损部位碱性磷酸酶（ALP）表达情况。
　　结果：
　　一：CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系的制备及性质检测：
　　（1）扫描电镜显示复合体系为多孔的交联网状结构且CSn（pDNA-BMP2）能均匀分散于水凝胶支架的三维网状结构中；
　　（2）试管倒置法显示：复合体系均可在37℃下3min内由可流动的溶胶状态转变为不可流动的凝胶状态。
　　二：CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性的测定：HE切片显示，复合体注入肌袋后，未见明显炎症反应。
　　三、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在非炎症性骨缺损中的修复作用测定：HE染色显示，两组相对于空白对照，均有不同程度的新骨修复，包载质粒组较无质粒组新骨生成量多且成熟度高。
　　四、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系在牙周炎症性骨缺损中的修复作用测定：
　　（1）Masson三染色显示包载质粒组与无质粒组，均有不同程度的牙槽骨再生，包载质粒组再生显著；
　　（2）钙钴法显示包载质粒组ALP强阳性，无质粒组ALP弱阳性，空白对照组为阴性。
　　结论：
　　一：CS/CSn-GP复合修复体系具有良好的组织相容性及温敏性，是一种良好的组织工程支架。
　　二：CS/CSn-GP复合修复体系有利于牙槽骨再生，包载pDNA-BMP2后促牙槽骨再生作用更为显著。

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引言

第一章：CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系的制备及性质检测

1.1 材料与设备

1.2 实验方法

1.3 结果

1.4 讨论

第二章：CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性的研究

2.1 材料与设备

2.2 实验方法

2.3 结果

2.4 讨论

第三章：CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP和CS/CSn-GP复合修复体系对大鼠颅骨缺损的诱导再生实验研究

3.1 材料与设备

3.2 实验方法

3.3 结果

3.4 讨论

第四章：CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP 和CS/CSn-GP 复合修复体系对犬牙槽骨再生的研究

4.1 材料与设备

4.2 实验方法

4.3 结果

4.4 讨论

结论

参考文献

综述:牙周组织再生的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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