LncRNA-MIAT在TNF-α介导的血管炎症中的表达及作用

摘要

目的：体外观察血管内皮细胞（endothelial cells，ECs）和血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）在肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）刺激下，细胞内长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(long non-coding RNA myocardial infarction associated transcript，LncRNA-MIAT)的表达变化，并探讨LncRNA-MIAT对ECs和VSMC炎症的调控作用。
　　方法：以TNF-α诱导ECs和VSMC炎症状态,采用Western Blot、PCR及qRT-PCR方法分别检测ECs和VSMC炎症状态下细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）和LncRNA-MIAT的表达情况。应用LncRNA-MIAT的小干扰核糖核酸(siRNA MAIT)转染ECs和VSMC,观察LncRNA-MIAT敲低对ICAM-1和VCAM-1表达的影响。通过划痕实验，观察ECs和VSMC的迁移功能。
　　结果：1.①内皮细胞PCR结果：与空白对照相比，加入lncRNA-MIAT引物的条带明显，提示ECs中表达LncRNA-MIAT，不同引物浓度的条带亮度的比较差异不明显，提示当引物浓度增加时，LncRNA-MIAT表达量增加不明显。②平滑肌细胞PCR结果：与空白对照相比，加入lncRNA-MIAT引物的条带明显，提示VSMC中表达LncRNA-MIAT，不同引物浓度的条带亮度的比较差异不明显，提示当引物浓度增加时，LncRNA-MIAT表达量增加不明显。2.①内皮细胞qRT-PCR结果：随着TNF-α刺激时间延长和刺激浓度增高，LncRNA-MIAT表达呈逐渐上升趋势。TNF-α刺激24 h、48 h其他刺激时长比较，lncRNA-MIAT表达量增多；TNF-α刺激浓度1.000 ng/ml、10.000 ng/ml与其他刺激浓度比较，lncRNA-MIAT表达量均增多，差异均具有统计学意义。②平滑肌细胞qRT-PCR结果：随着TNF-α刺激时间延长和刺激浓度增高，LncRNA-MIAT表达呈逐渐上升趋势。刺激12 h、24 h、48h其他刺激时长比较，lncRNA-MIAT表达量增多；刺激浓度10.00 ng/ml、20.000 ng/ml与其他刺激浓度比较，lncRNA-MIAT表达量均增多，差异均具有统计学意义。3.①内皮细胞RNA干扰结果：siRNA MAIT48h与siRNA Scramble比较，lncRNA-MIAT表达量明显下降，差异具有统计学意义；siRNA MAIT48 h与siRNA MAIT24 h相比，lncRNA-MIAT表达量下降，差异具有统计学意义。②平滑肌细胞RNA干扰结果：siRNA MAIT24h与siRNA Scramble比较，lncRNA-MIAT表达量明显下降，差异具有统计学意义；siRNA MAIT48 h与siRNA Scramble比较，lncRNA-MIAT表达量明显下降，差异具有统计学意义。4.①内皮细胞中ICAM-1的Western Blot结果：浓度为1.000 ng/ml的TNF-α刺激ECs后，ICAM-1的表达与空白对照相比显著增高，差异有统计学意义。应用siRNA MAIT转染ECs48 h后，应用浓度为1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs后，与阳性对照相比，ICAM-1表达量被明显抑制,差异有统计学意义；与空白对照相比，差异无统计学意义。②内皮细胞中VCAM-1的Western Blot结果：浓度为1.000 ng/ml的TNF-α刺激ECs后，VCAM-1的表达与空白对照相比显著增高，差异有统计学意义。应用siRNA MAIT转染ECs48 h后，应用浓度为1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs后，与阳性对照相比，VCAM-1表达量被明显抑制,差异有统计学意义；与空白对照相比，差异无统计学意义。③平滑肌细胞中ICAM-1的Western Blot结果：浓度为10.00 ng/ml的TNF-α刺激VSMC后，ICAM-1的表达与空白对照相比显著增高，差异有统计学意义。应用siRNA MAIT转染VSMC48 h后，应用浓度为10.00 ng/ml TNF-α刺激VSMC后，与阳性对照相比，ICAM-1表达被抑制,差异有统计学意义；与空白对照相比，差异无统计学意义。5.①内皮细胞划痕实验结果：浓度为1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs培养24h后，与空白对照相比，ECs迁移距离延长，差异有统计学意义。siRNA MAIT敲低后的ECs加入浓度为1.000 ng/mlTNF-α刺激ECs培养24h后，与空白对照相比，ECs迁移明显被抑制，差异有统计学意义。②平滑肌细胞划痕实验结果：浓度为10.00 ng/mlTNF-α刺激VSMC培养24h后，与空白对照相比，细胞迁移距离明显延长，差异有统计学意义。siRNA MAIT敲低后的VSMC加入浓度为10.00 ng/mlTNF-α刺激培养24h后，与空白对照相比，VSMC迁移明显被抑制，差异有统计学意义。
　　结论：LncRNA-MIAT可能参与血管的炎症反应，并可能起到促炎作用。

目录

引言

材料与方法

1 细胞来源

2 试剂

3 研究方法

4 统计学处理

结果

1 PCR结果

2 TNF-α不同时间与不同浓度刺激细胞后LncRNA-MIAT表达结果

3 siRNA干扰结果

4 Western Blot结果

5 划痕实验结果

讨论

结论

参考文献

综述:长链非编码RNA在心血管疾病中的研究及前景

攻读学位期间的研究成果

缩略词表

致谢

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