P2X4对帕金森病模型大鼠黑质中α突触核蛋白表达的影响

摘要

目的：探讨P2X4对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)诱导的帕金森病（Parkinson′s，PD)模型大鼠黑质中α突触核蛋白（α-synuclein）表达的影响。 方法：采用200-250gWistar雄性大鼠，随机分为对照组、6-OHDA组、空载病毒阴性对照（P2X4-NC）组、目的基因阴性对照（siRNA-P2X4）组、P2X4-NC+6-OHDA组、siRNA-P2X4+6-OHDA组，每组各30只。6-OHDA组、对照组分别用脑立体定位仪将6-OHDA或含0.02％抗坏血酸的生理盐水定向注射于大鼠左侧黑质，P2X4-NC组、siRNA-P2X4组分别用脑立体定位仪将空载阴性病毒或携带抑制P2X4表达的目的慢病毒定向注射于大鼠左侧黑质，P2X4-NC+6-OHDA组、siRNA-P2X4+6-OHDA组经黑质定位注射空载阴性病毒或携带抑制P2X4表达的目的慢病毒1周后，于左侧黑质定位注射6-OHDA。造模完成后2周，腹腔注射阿扑吗啡进行行为学试验，以后每周诱导1次，第4周筛选造模成功的大鼠断头取脑，取大鼠左侧黒质组织，采用Western blot方法检测大鼠左侧黑质中P2X4、α-synuclein、半胱氨酸蛋白水解酶1（caspase-1）蛋白的表达水平，采用荧光定量PCR法检测大鼠左侧黑质中P2X4、α-synuclein、caspase-1mRNA的表达水平，采用免疫组织荧光染色法检测各组大鼠左侧黑质中TH阳性神经元数量的变化。 结果：黑质多巴胺能神经元免疫荧光染色结果显示，与对照组比较，6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组黑质TH阳性多巴胺能神经元数量明显减少，差异有统计学意义(P＜0.01)；与P2X4-NC+6-OHDA组比较，P2X4-NC组和siRNA-P2X4+6-OHDA组大鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元数量明显增加，差异有统计学意义(P＜0.01)。与对照组比较，P2X4-NC组和siRNA-P2X4组TH阳性多巴胺能神经元数量与对照组相比无显著差异。Western blot检测结果显示，与对照组比较，6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组大鼠黑质内P2X4、α-synuclein、caspase-1表达量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.01）；P2X4-NC组、siRNA-P2X4+6-OHDA组大鼠黑质内P2X4的表达量较P2X4-NC+6-OHDA组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01）。siRNA-P2X4+6-OHDA组α-synuclein、caspase-1表达量较P2X4-NC+6-OHDA组减少，差异有统计学意义（P＜0.01）。荧光定量PCR结果显示：与对照组比较，6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组大鼠黑质P2X4的表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.01)；P2X4-NC组和siRNA-P2X4+6-OHDA组P2X4表达较P2X4-NC+6-OHDA组明显减少，差异有统计学意义(P＜0.01)；与对照组比较，6-OHDA组α-synuclein表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.01)；siRNA-P2X4+6-OHDA组α-synuclein 表达较P2X4-NC+6-OHDA组明显减少，差异有统计学意义(P＜0.001)；与对照组比较，6-OHDA组caspase-1表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.001)；siRNA-P2X4+6-OHDA组caspase-1表达较P2X4-NC+6-OHDA组减少，差异有统计学意义(P＜0.001)。 结论：P2X4在PD模型发病机制中具有一定作用，P2X4表达下调能够影响α-synuclein的表达，其机制可能是通过抑制caspase-1的表达来实现的，所以，P2X4表达下调可对多巴胺能神经元起保护作用。

目录

第一个书签之前