CBX8在肝细胞肝癌中的表达及对SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力和细胞周期的影响

摘要

目的：通过检测CBX8 mRNA和蛋白质在肝细胞肝癌组织中的表达及对肝癌细胞系SMMC-7721增殖、侵袭能力和细胞周期的影响，初步探讨CBX8在肝细胞肝癌发生发展中的作用及其意义。
　　方法：釆用实时荧光定量PCR和western blot分别检测15对新鲜肝细胞肝癌手术标本及癌旁组织中CBX8 mRNA和蛋白质的表达；釆用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测CBX8蛋白质在120例肝细胞肝癌手术标本及癌旁组织中的表达情况；分析 CBX8的表达与肝癌发生及临床病理特征之间的关系。分别在肝癌细胞系SMMC-7721中瞬时转染小干扰RNA和过表达质粒，通过MTT、平板克隆形成实验及transwell小室检测CBX8的敲降和过表达对肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖及侵袭能力的影响，通过细胞同步化及流式细胞仪检测 CBX8对肝癌细胞系SMMC-7721细胞周期的影响。
　　结果：实时荧光定量PCR结果显示CBX8 mRNA在13例（13/15）新鲜肝细胞肝癌手术标本中表达量增高，15例肝细胞肝癌与癌旁组织中的差异具有统计学意义（t=2.742，P＜0.05)。Western blot结果表明CBX8蛋白质在11例（11/15）新鲜肝细胞肝癌组织中表达量增高，15例肝细胞肝癌与癌旁组织中的差异具有统计学意义（t=2.686，P＜0.05)。组织芯片及免疫组化检测结果显示CBX8在100例（83.33%）肝细胞肝癌手术标本中表达，在46例（38.33%）癌旁组织中表达，CBX8在120例肝细胞肝癌及癌旁组织的表达差异具有统计学意义（Z=-8.072，P＜0.05)。CBX8在肝细胞肝癌中的表达水平与患者乙肝表面抗原（HBsAg）、肿物直径、被膜侵犯以及TNM分期有关（χ2=10.900、4.043、46.570、8.374，P＜0.05）。敲降 CBX8后，肝癌细胞系 SMMC-7721细胞的增殖、克隆形成率和迁移侵袭能力均下降，且与对照组相比差异均具有统计学意义(F=9.395、24.300、71.180、8.745、63.700、9.044，P＜0.05)；过表达 CBX8则结果相反，并且与对照组相比差异均具有统计学意义(F=7.177、36.100、24.680、9.045、7.037、6.525，P＜0.05)。通过检测细胞周期，我们发现敲降CBX8后，实验组G1期细胞所占比例明显增加，S期细胞所占比例减少，差异有统计学意义（t=3.170、3.269, P＜0.05）；过表达CBX8后，实验组G1期细胞所占比例明显减少，S期细胞所占比例增加，差异有统计学意义（t=2.884、4.443, P＜0.05）。
　　结论： CBX8在肝细胞肝癌中呈显著高表达；CBX8在肝细胞肝癌的发生发展中发挥重要作用，能够促进肝癌细胞系 SMMC-7721的增殖、迁移、侵袭等生物学行为，并可能通过调控细胞周期G1/S转换进而影响SMMC-7721细胞周期进程；CBX8在肝细胞肝癌发生发展中发挥癌基因作用。

目录

引言

材料与方法

1材料

1.1主要试剂

1.2主要仪器及分析软件

1.3肝细胞肝癌标本收集与处理

1.4细胞培养

2.方法

2.1实时荧光定量PCR（qRT-PCR）

2.2蛋白质免疫印迹 (western blot)

2.3组织芯片及免疫组化

2.4肝癌细胞系SMMC-7721细胞转染

2.5 MTT实验

2.6 平板克隆形成实验

2.7 Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力

2.8 流式细胞仪检测细胞周期

2.9统计学分析

2.10引物及siRNA序列表

结果

1 CBX8 mRNA在肝细胞肝癌新鲜组织中表达上调

2 CBX8蛋白质在肝细胞肝癌新鲜组织中表达上调

3 CBX8蛋白质在组织芯片中的表达情况

4 CBX8在肝细胞肝癌中的表达与临床病理特征之间的关系

5肝癌细胞系SMMC-7721转染结果

6 CBX8对肝癌细胞系SMMC-7721增殖和克隆形成能力的影响

7 CBX8对SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响

8 CBX8对SMMC-7721细胞周期进程的影响

讨论

结论

参考文献

综述：CBX8与肿瘤关系的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

声明