Ghrelin、GHRP-6和胃动素对大鼠胃肠动力调控研究

摘要

目的： Ghrelin是含有28个氨基酸的脑肠肽，又称为胃动素相关肽。其可调控生长素的分泌、参与摄食、能量平衡、睡眠/觉醒以及心血管活动等多方面的调控。人胃动素（Motilin）在结构上与ghrelin有36%相似性，其主要参与胃肠移行性综合运动（MMC）调控。本研究拟探讨ghrelin及其受体拟似剂生长激素释放肽-6（GHRP-6）、胃动素对大鼠胃肠动力的影响及潜在机制。 方法： 采用腹腔注射给药方法，分别观察ghrelin、GHRP-6及胃动素对大鼠胃排空和小肠推进的影响；离体实验观察ghrelin、GHRP-6及胃动素对大鼠电场刺激诱导胃窦和胃底平滑肌舒缩反应的影响及潜在机制；采用RT-PCR观察ghrelin mRNA在胃组织的表达；采用Western blot观察Ghrelin受体（GHSR）在胃组织的表达。 结果： 1.在体研究结果显示，与生理盐水（NS）对照组相比，大鼠腹腔注射30μg/kg ghrelin（P＜0.05）或60μg/kg ghrelin（P＜0.01）可显著增加大鼠胃排空率，但10μg/kg或120μg/kgghrelin对大鼠胃排空率无明显影响（P＞0.05）。与NS对照组相比，腹腔注射不同浓度ghrelin（10μg/kg、30μg/kg、60μg/kg、120μg/kg），仅60μg/kgghrelin可显著增加小肠推进率（P＜0.05）。 2.与NS对照组相比，腹腔分别注射10μg/kg、40μg/kg、80μg/kg或120μg/kg GHRP-6，大鼠胃排空率均显著上升（P＜0.05~0.01），且呈明显量效依赖关系；与NS对照组相比，腹腔分别注射40μg/kg、80μg/kg或120μg/kgGHRP-6，大鼠小肠推进率显著增高，且呈明显量效依赖关系（P＜0.05~0.01）。 3.与NS对照组相比，腹腔注射20μg/kg或80μg/kg胃动素对大鼠胃排空率无明显影响（P＞0.05），但腹腔注射高剂量的胃动素（120μg/kg），可使大鼠胃排空率显著增加（P＜0.05）。与NS对照组相比，腹腔注射胃动素（20或120μg/kg）对大鼠小肠推进率均无明显影响（P＞0.05）。 4.离体研究结果显示，L-NAME（N-硝基-L-精氨酸甲酯酸盐，250μM）可使平滑肌条开电刺激的舒张反应变为收缩反应（P＜0.05），提示，开电刺激引起的舒张反应可能是由NO所介导。而在非肾上腺素能、非胆碱能条件下（NANC，5×10-6mol/L阿托品和3×10-6mol/L胍乙啶），胃底平滑肌断电刺激的收缩反应消失（P＜0.05），提示，断电刺激引起的收缩反应可能是由胆碱能介导的。 5.在胃底平滑肌研究发现，2μM ghrelin可显著抑制胃底平滑肌条在1Hz、8-16Hz开电刺激下的舒张反应（P＜0.05~0.01），并增强胃底平滑肌条4-8Hz断电刺激下的收缩反应（P＜0.05~0.01，）。本研究还发现，给予4Hz场刺激，L-NAME可显著增强ghrelin诱导的胃底平滑肌条收缩作用（P＜0.05）；2μM GHRP-6可使胃底平滑肌在2Hz及16Hz开电刺激舒张反应减弱（P<0.01），并增强胃底平滑肌在8-16Hz断电刺激收缩反应（P＜0.05~0.001）。本研究还发现，给予2-8Hz电场刺激，L-NAME可增强GHRP-6诱导的胃底平滑肌条舒缩活动（P＜0.01~0.001）；但2μM胃动素对胃底平滑肌（1-16Hz开电或断电刺激）的舒缩无显著影响（P＞0.05），经L-NAME孵育后胃动素对胃底平滑肌条的舒缩反应仍无显著改变（P＞0.05）。 6.在胃窦平滑肌研究发现，给予胃窦平滑肌条场刺激，在开电刺激时并未出现与胃底平滑肌相类似的舒张反应，仅在断电刺激下出现了明显的收缩反应。但L-NAME可使胃窦平滑肌收缩反应增强，提示，胃窦平滑肌断电刺激收缩效应可能是由胆碱能介导的；NANC（5μM阿托品和3μM胍乙啶混合液）可完全阻滞场刺激诱导的胃窦平滑肌舒缩活动（P＞0.05）。 7.2μM ghrelin或2μM GHRP-6可使胃窦平滑肌在4-16Hz断电刺激下的收缩反应显著增强（P＜0.05~0.01）；L-NAME预先孵育肌条，可显著增强ghrelin（1-8Hz）或GHRP-6（1-16Hz）诱导的胃窦平滑肌条收缩作用（P＜0.05~0.01）；但2μM胃动素对平滑肌在不同强度场刺激下的舒缩反应无显著影响（P＞0.05），且L-NAME预先孵育肌条也不能显著改变胃动素对胃窦平滑肌的舒缩反应（P＞0.05）。 8.RT-PCR和Western blot结果显示，大鼠胃窦部及胃底部均有GHSR mRNA和蛋白表达。 结论： 促进大鼠胃排空或小肠推进作用强弱依次为Ghrelin，GHRP-6，胃动素；大鼠胃平滑肌在场刺激下的舒缩反应是由神经介导的；开电刺激的舒张反应可能是由NO介导，断电刺激的收缩反应可能是由胆碱能介导；ghrelin和GHRP-6可促进胃平滑肌舒缩，该效应可能与NO信号通路有关。

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