生米卡链霉菌原生质体种间融合及其融合子的特性考察

摘要

该论文主要研究了生米卡链霉菌与红霉素链霉菌原生质体种间融合育种,以提高麦迪霉素A<,1>（MDMA<,1>）的组分,增加其对丙酸盐的利用度,降低生产成本.首先在对两亲株的生物学特性进行了鉴定后,考察了影响两亲株原生质体形成和再生的主要因素,确定了生米卡链霉菌和红霉素链霉菌原生质体形成及再生的最佳条件.其次,确定了原生质体融合的基本条件及灭活原生质体融合的条件.然后,对所获得的原生质体融合子进行了反复筛选,获得了Rh107、Rh109、Rh109-2、Rh109-15等优秀的融合重组子.最后,以Rh109-2为出发菌株,对融合重组子进行了生物学特性的考察.

目录

摘要

ABSTRACT

第一章前言

第二章材料和方法

2.1材料

2.1.1菌种

2.1.2培养基

2.1.3溶液

2.1.4试剂

2.1.5仪器设备与软件

2.2方法

2.2.1生米卡链霉菌原生质体的制备方法

2.2.2红霉素链霉菌原生质体的制备方法

2.2.3原生质体再生的方法

2.2.4原生质体融合的方法

2.2.5原生质体灭活的方法

2.2.6融合菌的筛选方法

2.2.7发酵液中麦迪霉素含量的测定方法

2.2.8麦迪霉素抽提液的制备方法

2.2.9组分的测定方法

第三章实验结果

第一部分出发菌株的分离纯化及性状考察

3.1.1生米卡链霉菌的正常菌落形态

3.1.2红霉素链霉菌的正常菌落形态

3.1.3生米卡链霉菌的生产能力考察

3.1.4出发菌株对丙酸盐的抗性能力

第二部分原生质体的制备及再生

3.2.1原生质体制备条件考察

3.2.2再生条件的考察

第三部分原生质体融合

3.3.1双菌原生质体融合条件的考察

3.3.2双菌株原生质体融合条件的考察

3.3.3原生质体融合方法

第四部分融合子的筛选

3.4.1融合子的初步筛选

3.4.2融合重组子的固体筛选

3.4.3融合重组子的液体筛选

第五部分Rh109-2的生物学特性考察

3.5.1 Rh109-2的培养特性的考察

3.5.2融合子的稳定性考察

3.5.3融合子发酵条件考察

3.5.4补料条件的考察

3.5.5增效试验

第四章结论

第五章讨论

附录

致谢