CPPU对日本小果树HASKAOP组织培养的影响及超低温保存

摘要

日本北海道特产高营养小果树HASKAOP原产于日本北海道，是一种营养非常丰富的野生果树，具有极高的经济价值和药用价值。为了成功保存北海道特产小果树HASKAOP种质资源，本试验将近年来新发现的一种细胞分裂素CPPU应用于小果树的组织培养中，探索其促进小果树扩繁的最佳使用浓度，并用超低温的方法保存种质资源，以期为小果树种质资源的离体保存提供理论依据。主要研究结果如下： 1.为了探索CPPU在北海道特产小果树HASKAOP组织培养中的应用效果，就CPPU单独使用及其与6—BA组合后对小果树节间不定芽的分化诱导效果进行了试验。结果表明：单独添加CPPU的最佳诱导浓度为0.2 mg/L，6—BA0.5mg/L和CPPU0.5 mg/L配比组合是北海道特产小果树HASKAOP节间分化不定芽的最佳组合，并且CPPU的作用强于6—BA。 2.建立了小果树节间玻璃化法超低温保存体系。其保存方法为：0.5～0.7cm的节间，在含有0.7mol/L蔗糖的培养基上预培养2d，然后剥取2.5～3.5mm的节间，先在室温下用60％ PVS2溶液预处理20～30min，再用100％ PVS2溶液于0℃下处理60min，换一次PVS2溶液后迅速投入液氮。24h后取出，在37℃～40℃水浴中化冻2min，用1—2mol/L的蔗糖培养液洗涤2次，每次10min，然后转入1/2 MS+6—BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L恢复培养基上，暗培养1周后转移到正常光下，最高可获得80.00％的成活率和51.11％的再生率。 3.对超低温保存后节间的恢复培养基进行了筛选。超低温保存后的小果树节间在1/2 MS+6—BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L的培养基上恢复生长最好，节间成活率和再生率最高，分别为73.33％和51.11％。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表目录、缩略词表

声明

第一章引言

1 CPPU研究进展及其应用

1.1 CPPU研究进展

1.2 CPPU在农业上的应用

2植物种质资源离体保存方法的研究

3离体植物材料的超低温冰冻保存技术

3.1超低温保存技术研究进展

3.2超低温保存的原理及基本程序

3.3材料的选择

3.4材料的预处理

3.5冰冻保护剂预处理

3.6降温冰冻操作

3.7化冻操作

3.8化冻材料的活力检测

4现状与展望

5本试验研究的目的及意义

第二章CPPU对北海道特产小果树HASKAOP组培苗节间分化不定芽的影响

1材料与方法

1.1供试材料

1.2试验方法

2结果与分析

2.1不同浓度CPPU对HASKAOP不定芽分化的影响

2.2 6-BA+CPPU组合对HASKAOP不定芽分化的影响

2.3 CPPU+6-BA组合对HASKAOP不定芽分化的影响

3讨论

第三章日本北海道特产小果树HASKAOP节间玻璃化法超低温保存

1材料与方法

1.1试验材料

2试验方法

2.1继代培养

2.2预培养

2.3玻璃化保护剂处理

2.4液氮保存

2.5化冻和洗涤

2.6恢复生长

3结果与分析

3.1不同继代时间对小果树节间超低温保存效果的影响

3.2蔗糖浓度及预培养时间对小果树节间超低温保存效果的影响

3.3不同冰冻保护剂对小果树节间超低温保存效果的影响

3.4不同冰冻保护剂处理方式对小果树节间超低温保存效果的影响

3.5超低温保存时间对小果树节间超低温保存效果的影响

3.6不同化冻方法对小果树节间超低温保存效果的影响

3.7不同恢复培养基对小果树超低温保存效果的影响

4讨论

4.1提高冷冻后细胞或组织存活率的方法

4.2其他影响存活率的因素

第四章结论

致谢

参考文献

附图

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