蓝舌病病毒内蒙分离株VP基因5'端片段的克隆、序列分析及地高辛探针检测

摘要

根据蓝舌病病毒已报道的外壳蛋白VP<,2>基因序列保守区设计合成两对引物,以蓝舌病病毒内蒙分离株总RNA为模板,逆转录合成cDNA第一链;经PCR扩增并回收扩增后的DNA片段,与pGEM-T载体连接构成重组质粒,转化大肠杆菌JM109;筛选出含有插入片段的重组质粒,用PCR法鉴定后,获得了带有蓝舌病病毒内蒙分离株的外壳蛋白VP<,2>基因部分片段的cDNA克隆,序列分析表明此片段长为249bp,与蓝舌病病毒澳大利亚株同源性为40﹪.用结合高辛的11-dUTP标记克隆的蓝舌病病毒内蒙分离株cDNA片段,制备成探针,通过核心酸斑点杂交对粗提取的不同来源蓝舌病病毒RNA进行了检测,结果表明此探针对蓝舌病病毒内蒙株具有特异性,且灵敏度高,可探测出50pg的病毒RNA.该研究为蓝舌病病毒内蒙分离株的进一步鉴定创造了必要的条件.

目录

摘要：

前言：

材料与方法：

1.材料：

2.方法：

2.1引物设计与合成：

2.2蓝舌病病毒电镜观察和RNA的提取：

2.3逆转录-聚合酶链反应扩增目的基因片段：

2.4病毒cDNA片段的克隆：

2.5测序：

2.6.地高辛标记探针：

2.7.斑点杂交法检测病毒RNA：

结果：

1.蓝舌病病毒电镜观察：

2.逆转录-聚合酶链反应扩增目的基因片段：

3.重组质粒的PCR鉴定：

4.插入片段测序：

5.地高辛标记探针：

6.斑点杂交法检测病毒RNA

小结

讨论：

参考文献：

英文摘要：

致谢：

综述：

附图